一、先懂核心:TBNK 淋巴细胞
T 细胞(CD3+):细胞免疫的核心,分为 CD4 + 辅助 T 细胞(免疫 “指挥官”,调控其他免疫细胞活化)、CD8 + 细胞毒性 T 细胞(免疫 “杀手”,直接杀伤感染 / 癌变细胞),还有 CD4+CD25+Foxp3 + 调节性 T 细胞(Treg,免疫 “刹车”,维持免疫平衡,防止自身免疫)。
B 细胞(CD19+):体液免疫的核心,活化后产生抗体,中和病毒、细菌等病原体,是体液免疫的直接执行者。
NK 细胞(CD3-CD56+):天然免疫的 “快速反应部队”,无需提前致敏,就能直接杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞,是机体抗肿瘤、抗病毒的第一道防线。
功能标志物:TIM-3(T 细胞免疫检查点,反映 T 细胞耗竭状态,慢性感染、肿瘤中高表达)、Foxp3(Treg 的特异性胞内标志物,鉴定调节性 T 细胞)、CD25(T 细胞活化标志物,Treg 高表达)。
淋巴细胞的比例异常,直接提示免疫功能紊乱:
免疫缺陷:CD4+、CD8+T 细胞数量减少
病毒感染 / 肿瘤:CD8+T 细胞增多,TIM-3 表达升高
体液免疫抑制:CD19+B 细胞减少
自身免疫病:Treg 数量 / 功能异常
因此,TBNK 淋巴细胞分型是评估免疫功能、指导疾病诊疗、开展免疫研究的核心检测项目。
二、为什么选 UFBP018 10 色 TBNK Panel?
传统的 TBNK 检测多为 3-4 色方案,只能区分大类细胞,无法精细分析功能亚群,且需要多次染色,浪费样本、时间,增加实验误差。UFBP018 10 色方案,直击科研痛点,优势显著:
一次检测,全亚群覆盖:10 种标志物同步染色,一次性区分 T、B、NK 细胞,以及 CD4+、CD8+T 细胞、Treg、耗竭 T 细胞等功能亚群,无需多次实验
预优化配色,零荧光干扰:专为 BD FACSCelesta 3 激光 12 色流式仪设计,严格验证荧光通道匹配,保证信号分离度和检测准确性
表面 + 胞内双标,功能更全面:不仅检测表面标志物,还加入 Foxp3 等胞内指标,可深入分析免疫细胞的功能状态,而不仅仅是数量
兼容高级数据分析:支持 t-SNE、FlowSOM、ClusterExplorer 等降维聚类分析,轻松挖掘细胞亚群的内在关联,发现微小亚群
节省样本与时间:仅需少量人外周血,一次染色上机,大幅提升实验效率,降低实验成本
标准化方案,结果可重复:经过严格验证的标准化方案,批次间差异小,结果稳定可靠,适合大样本量研究
三、UFBP018 10 色方案全解析
1. 实验基本信息
适用样本:人外周血(Human blood)
实验类型:多色流式细胞术(Multicolor flow cytometry),表面 + 胞内染色(Surface and intracellular marker staining)
推荐仪器:3 激光 12 色 BD FACSCelesta 流式细胞仪(兼容主流 3 激光流式平台)
分析软件:FlowJo v10(支持常规设门、降维、聚类分析)
2. 10 色标志物 & 荧光搭配表
| 激光通道 | 标志物 | 荧光染料 | 克隆号 | 每测试用量 | 货号 | 核心作用 | Violet 405nm
死活染料(L/D)
BV510
/
2μl
区分活细胞与死细胞,排除死细胞干扰
Violet 405nm
CD3
BV786
SK7
5μl
标记总 T 细胞
Violet 405nm
CD4
BV421
RPA-T4
5μl
区分 CD4 + 辅助 T 细胞
Violet 405nm
CD8
BV650
RPA-T8
5μl
区分 CD8 + 细胞毒性 T 细胞
Violet 405nm
CD25
BV605
2A3
5μl
标记活化 T 细胞、Treg
Blue 488nm
CD19
FITC
HIB19
5μl
标记 B 细胞
Blue 488nm
CD56
PerCP-Cy5.5
B159
5μl
标记 NK 细胞
Blue 488nm
TIM-3
PE
7D3
5μl
标记耗竭 T 细胞,反映免疫功能状态
Red 640nm
CD45
APC-CY7
2D1
5μl
圈门总白细胞,排除非白细胞干扰
Red 640nm
Foxp3
AF647
259D/C7
5μl
特异性标记 Treg 细胞
3. 标准设门逻辑
我们通过层层设门,从总细胞中逐步分离出目标细胞亚群,对应下图的细胞分群层级:
1,从总细胞中筛选单细胞(去黏连),再通过 FSC/SSC 圈出淋巴细胞群
2,用死活染料圈出活细胞,排除死细胞干扰
3,通过 CD3 + 鉴定总 T 细胞,再用 CD4/CD8 区分 CD4 + 辅助 T 细胞、CD8 + 细胞毒性 T 细胞,进一步用 CD25/Foxp3 圈出 Treg 细胞
4,从 CD3 - 非 T 细胞中,用 CD19 + 圈出 B 细胞,用 CD56 + 圈出 NK 细胞

从总 T 细胞分化出 CD4+、CD8+T 细胞,再到 Treg,同时区分 NK、B 细胞,清晰展示细胞分群逻辑
四、实验结果可视化
通过 FlowJo v10 软件的高级分析工具,我们可以将 10 色流式的复杂数据,转化为直观易懂的图表,帮您快速解读免疫细胞状态:
1. 传统逻辑设门散点图
这是流式分析的基础,通过层层设门,精准分离各个细胞亚群,计算各亚群的比例和数量:
从左到右:先筛选单细胞→圈出淋巴细胞→圈出活细胞→区分 T 细胞 / 非 T 细胞→区分 CD4+/CD8+T 细胞→区分 B 细胞、NK 细胞
每个门都标注了细胞比例,帮您精准定量各免疫细胞亚群

2. t-SNE 降维分群图
t-SNE 是一种降维分析工具,将高维的 10 色流式数据,简化为二维散点图,让不同免疫细胞的分群清晰可见:
左图:未分群的活细胞,所有细胞混合展示
右图:根据标志物表达自动分群后的结果,不同颜色对应不同的免疫细胞亚群(如蓝色 = CD4+T、黄色 = CD8+T、橙色 = B 细胞等),直观展示各细胞群的分布、比例和内在联系
大幅提升数据可视化程度,集成海量信息,一眼看懂免疫细胞分群

3. t-SNE 标志物表达热图
在 t-SNE 降维图的基础上,用颜色深浅展示不同标志物在各细胞群的表达情况:
每个子图对应一个检测标志物,颜色越红代表表达越高,越蓝代表表达越低
帮您直观验证细胞分群的准确性,比如 CD3 + 在 T 细胞群高表达,CD19 + 在 B 细胞群高表达,关键靶点的表达一目了然

4. 细胞亚群表达热图 Heatmap
热图通过颜色深浅,直观展示不同细胞亚群的标志物表达强度:
行代表不同的细胞亚群(Pop0-Pop7),列代表检测的标志物
颜色越红代表表达越高,越蓝代表表达越低,帮您快速区分不同细胞类型的特征,验证分群准确性,挖掘亚群间的表达差异

5. FlowSOM 聚类分析图
FlowSOM 是一种自动聚类算法,基于细胞的标志物表达,自动将相似细胞聚为一类,并展示细胞亚群的亲缘关系:
图中每个节点代表一个细胞亚群,饼图展示该亚群的标志物表达情况
背景颜色代表聚类分组,帮您快速识别未知细胞亚群,挖掘潜在的免疫细胞新类群,探索亚群之间的相关性

Q1:这个 Panel 只能用于人外周血吗?
A1:该方案主要针对人外周血设计,也可适配 PBMC(外周血单个核细胞)等免疫细胞样本,具体可根据实验需求调整。
Q2:没有 BD FACSCelesta 流式仪,能用这个 Panel 吗?
A2:该方案的荧光搭配是针对 BD FACSCelesta 3 激光流式仪优化的,若您使用其他型号的 3 激光流式仪,可联系优宁维技术团队,帮您调整适配方案。
Q3:数据分析难度大吗?新手能上手吗?
A3:我们提供标准的设门逻辑和分析流程,同时 FlowJo 软件有现成的 t-SNE、FlowSOM、ClusterExplorer 插件,操作简单,新手也能快速完成数据分析,我们还提供技术支持,帮您解决分析难题。
Q4:这个方案可以用于临床检测吗?
A4:该方案为科研级试剂,适用于科研和临床前研究;若用于临床诊断,需符合相关法规要求,并完成临床验证。
Q5:需要自己搭配荧光吗?
A5:不需要,UFBP018 是预优化的完整 Panel,所有荧光搭配已经过严格验证,开箱即可使用,避免自行搭配的荧光干扰问题。
Hu CD19 FITC HIB19 100Tst
100 Tests
Hu CD45 APC-Cy7 2D1 100Tst
100 Tests
Hu FoxP3 Alexa 647 259D/C7 100Tst
100 Tests
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