人肝癌细胞HuH-7/OVA

人肝癌细胞HuH-7/OVA培养条件

人肝癌细胞HuH-7/OVA收货后处理

A、复苏细胞处理方法：培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，严格无菌后将细胞瓶放置培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态。静置后显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

B、冻存细胞处理方法：收到细胞后，观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好无损是否有解冻情况，若发现干冰完全汽化或冻存管有解冻破损现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。复苏第一管如有活性问题，请及时联系我们，技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管，未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：如细胞密度超过80%，即可进行传代培养，步骤如下：

1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置培养箱中消化 1-2min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化；

3) 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000 rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀；

4) 按5-6mL每瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培养基的6cm培养皿中或者T25培养瓶中。

（即1个T25瓶传代接种至2个T25瓶或者2个6cm的培养皿）

b、细胞冻存：细胞收集参照传代步骤，按冻存数量（推荐每支冻存管5×10⁶左右细胞数量冻存），加入1ml的我司无血清冻存液（货号：C7001），轻轻混匀后，放-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐中。

C、细胞复苏：从液氮灌或-80℃冰箱中找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。

1) 将冻存细胞在37℃水浴中迅速摇晃解冻；

2) 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000 rpm离心5min；

3) 弃去上清液，补加5mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中或6cm皿中，培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

人肝癌细胞HuH-7/OVA注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中细胞容易脱落，这是正常现象。如脱落较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5-8min，收集上清作过渡培养，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-6ml/瓶，最后放入细胞培养箱中培养。