五肽-3的概述与制备方法

概述

维洛丝肽是一种五胜肽，又称五肽-3或Vialox,由甘氨酸、脯氨酸、精氨酸和丙氨酰氨连接而成，属于一种神经递质抑制类胜肽，能通过抑制乙酰胆碱受体过度释放，局部阻断神经传递肌肉收缩讯息，使脸部肌肉放松，达到抚平皱纹、使皮肤光滑、紧致的目的。维洛丝肽的研制成功是抗皱活性胜肽类化合物的一个重大突破，其应用广泛，特别适合应用于表情肌集中的部位如眼角、脸部、额头等。

经过几十年的发展，随着市场需求的逐年增加和极具潜力的多肽类产品的开发，带来了巨大的经济和社会效益。我国化妆品在生产和销售方面取得良好的发展，虽取得了长足的进步，然仍面临着生产工艺落后、研发缺乏创新性等问题。因而开发一种新型高效的液相规模化合成方法成了急需解决的技术难题。

五肽-3化学结构式

基本信息

中文名称：五肽-3

英文名称：Pentapeptide-3

公司编号：GT-C044

CAS号：135679-88-8

序列：H-Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-NH2

分子式：C21H37N9O5

分子量：495.59

制备方法

1、向500mL三口瓶中加入17.5g(0.1mol)Boc-Gly-OH和200mL四氢呋喃，搅拌溶解后降温至0～5℃,加入13.8g(0.12mol)N-羟基丁二酰亚胺搅拌10分钟后加入32.8g(0.15mol)N,N³-二环己基碳酰亚胺；保持5～15℃反应4小时后，过滤，向滤液中加入19.8g(0.12mol)H-Pro-0Me·HC1和100mL3mol/L碳酸氢钠水溶液，在15～25℃下搅拌反应8小时，停止反应；反应液减压脱除溶剂后倒入200mL水中，用乙酸乙酯萃取(100mL×3次),有机相用0.5mol/L盐酸洗涤至水相pH=3～4,有机相用200mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥12小时，过滤，减压脱除溶剂，得到27.2g白色固体，即Boc-Gly-Pro-0Me,收率95%。

五肽-3 HPLC图

2、向500mL三口瓶中加入21.5g(0.1mol)Boc-Pro-0H和150mL二氯甲烷，搅拌溶解后降温至-15～-10℃,加入33mL(0.30mol)N-甲基吗啡啉，然后缓慢滴加14mL(0.108mol)氯甲酸异丁酯，保持此温度反应30分钟；将11g(0.124mol)H-Ala-NH₂溶解于50mL二氯甲烷后缓慢加入上述三口瓶中，在-15～-10℃下反应1小时后自然升温至室温反应6小时，停止反应，将反应液倒入300mL水中，静置分液，水相用100mL二氯甲烷萃取一次，萃取后的二氯甲烷相用0.5mol/L盐酸洗涤一次，再用100mL饱和氯化钠水溶液洗涤，减压脱除溶剂，得到25g白色固体，即Boc-Pro-Ala-NH₂,收率87.7%。将得到的Boc-Pro-Ala-NH₂加入200mL4mol/L氯化氢的乙酸乙酯溶液中，在0～10℃下搅拌反应2小时后过滤，固体用乙酸乙酯洗涤后40℃真空干燥，得到H-Pro-Ala-NH₂·HCl。

3、向1000mL三口瓶中加入32.4g(0.05mol)Fmoc-Arg(Pbf)-OH和300mL二氯甲烷，搅拌溶解后降温至-15℃,加入6.8g(0.05mol)1-羟基苯并三唑和10g(0.10mol)N-甲基吗啡味，搅拌15分钟后加入9.6g(0.05mol)N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，在-15～-10℃下反应45分钟；将13.3g(0.06mol)H-Pro-Ala-NH₂·HC1、15g(0.15mol)N-甲基吗啡味溶于100mL二氯甲烷后滴加到三口瓶中，在-10～-5℃下反应1小时后自然升温至室温搅拌反应6小时，停止反应，将反应液倒入500mL水中，静置分液，水层用200mL二氯甲烷萃取，萃取后的二氯甲烷相依次经1mol/L的盐酸洗涤、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压脱除溶剂，得到34.7g白色固体，即Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Ala-NH₂,收率85%。

五肽-3 MS图

4、向1000mL三口瓶中加入20g(0.03mol)Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Ala-NH₂和100mL体积浓度为20%的哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌反应1小时后，加入50mL含12.9g(0.045mol)Boc-Gly-Pro-0Me的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌反应24小时，停止反应，将反应液倒入300mL水中搅拌，加入柠檬酸使得体系有大量白色固体析出，过滤，水洗，真空干燥后用乙酸乙酯打浆两次，固体过滤后真空干燥，得到15g白色固体Boc-Gly-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Ala-NH₂,收率72.2%。然后将Boc-Gly-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Ala-NH₂加入200mL三氟乙酸与三异丙基硅烷、水的体积比为90:5:5的混合液中，室温搅拌反应1小时后减压脱除溶剂，浓缩液倒入200mL丙酮中，搅拌下滴加浓盐酸至有大量白色固体析出，过滤，固体用丙酮洗涤，真空干燥，得到白色固体H-Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-NH₂·HCl。将H-Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-NH₂·HC1加入到50mL水中，离子交换除盐酸(以体积分数为2%的乙酸水溶液恒流，检测波长210nm,流速10mL/min,色谱柱规格：5cm×45cm,填料DEAE),最后冷冻干燥，得到8g白色固体，即维洛斯肽，收率66%、纯度大于95%。

注：上述的Boc代表叔丁氧羰基，Fmoc代表9-笏甲氧羰基，Pbf代表2,2,4,6,7-五甲基苯并二氢呋喃-5-磺酰基。

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