SBI 整合类载体：PiggyBac 转座系统的应用与优势

PiggyBac 转座子是一种源于鳞翅目昆虫的移动遗传元件，最初在杆状病毒侵袭粉纹夜蛾细胞时被发现。作为真核生物的第二类转座子，它自带转座酶编码区与反向末端重复序列（ITR），能较少依赖宿主因子实现高效转座 —— 这一特性让它成为基因整合研究的热门工具。美国 SBI 公司基于 PiggyBac 转座子，开发了一套实用的整合类载体系统，可广泛用于哺乳动物细胞的基因整合与功能研究。

一、PiggyBac 转座子的基础结构

PiggyBac 转座子全长约 2472 bp，核心结构包含两部分（见图 1）：

反向末端重复序列（ITR）：包含 13 bp 与 19 bp 两段序列，是转座酶的特异性结合位点；

开放阅读框（ORF）：长约 2.1 kb，编码负责转座过程的转座酶。

[图 1：PiggyBac 转座酶结构示意]

二、SBI PiggyBac 整合类载体系统的核心特点

SBI 的 PiggyBac 整合类载体系统，是为高效基因整合设计的实用工具，核心优势包括：

1,操作便捷：单次转染即可生成转基因细胞系，还能同时整合多个 PiggyBac 载体；

2,适用广泛：支持人、小鼠、大鼠等哺乳动物细胞的基因插入；

3,容载量大：可插入 10~100 kb 的 DNA 片段，适配大基因片段的研究；

4,工具配套：

用 PBC100A-1（PiggyBac qPCR Copy Number Kit）可检测基因整合拷贝数；

搭配 PB220PA-1（Excision only 转座酶载体），能实现基因插入的 “无痕去除”。

三、PiggyBac 转座系统的工作机制

PiggyBac 载体的转座过程分为 3 个关键步骤（见图 2）：

1,切除：Super PiggyBac 转座酶结合载体上的 ITR 序列，将 “ITR - 表达盒 - ITR” 片段从载体上切除；

2,插入：转座酶将上述片段精准整合到宿主基因组的 TTAA 位点处；

3,无痕去除（可选）：用 Excision-only 转座酶，可将基因组中的 “ITR - 表达盒 - ITR” 片段完全移除，且不留下多余序列。

[图 2：PiggyBac 转座机制示意图]

四、SBI PiggyBac 系统的产品性能

SBI 的 PiggyBac 整合类载体系统，在实验中展现出了高效的基因整合能力与实用的无痕去除效果：

1. 高效基因整合（见图 3）

将转座酶载体与双启动子 PiggyBac 载体共转染 HeLa 细胞，经嘌呤霉素筛选后，仅添加转座酶的组（+PB）出现大量 GFP 阳性细胞；

在 HEK293 细胞中使用单启动子载体，加转座酶的组（+PB）多数细胞呈现 RFP 阳性 —— 这证明该系统的基因整合效率极高。

[图 3：PiggyBac 系统的高效转基因效果]

2. 无痕基因去除（见图 4）

利用 Excision-only 转座酶，可将已整合到基因组中的表达盒片段彻底移除，实现 “无痕逆转” 基因插入，避免残留序列干扰后续实验。

[图 4：PiggyBac 系统的无痕基因去除效果]

常见问题解答

SBI PiggyBac 整合类载体适用于哪些细胞类型？

主要支持人、小鼠、大鼠来源的体外培养哺乳动物细胞，如 HeLa、HEK293 等常用细胞系。

该载体能插入的 DNA 片段最大有多大？

可支持 10~100 kb 的 DNA 片段插入，能满足多数大基因或多基因表达盒的整合需求。

如何检测基因的整合拷贝数？

可搭配 SBI 的 PBC100A-1 试剂盒（PiggyBac qPCR Copy Number Kit），通过 qPCR 实现精准检测。

无痕去除基因插入的操作复杂吗？

不复杂，只需额外转染 PB220PA-1（Excision only 转座酶载体），流程与常规细胞转染一致。

可以同时整合多个 PiggyBac 载体吗？

可以，该系统支持一次转染中整合多个 PiggyBac 载体，方便多基因共表达的研究。