外泌体 RNA 研究全流程：从样本到结果的实用指南

外泌体（EVs）作为细胞间的 “纳米信使”，其携带的 RNA 分子在疾病诊断、靶向治疗等领域展现出巨大潜力。无论是作为液体活检的生物标志物，还是精准医疗的治疗载体，外泌体 RNA 研究都备受关注。但在实际操作中，从样本处理到 RNA 分析，每一步都暗藏 “坑点”。

一、样本预处理：避免细胞 RNA 干扰的关键一步

要精准分析外泌体 RNA，必须先彻底清除样本中的细胞、细胞碎片和凋亡小体。因为残留的细胞 RNA 数量远超外泌体 RNA，哪怕少量碎片，也会严重干扰 RNA 谱分析。

不同样本的预处理要点：

血清 / 血浆样本：采血后尽快通过低速离心分离血细胞，越早处理越能减少体外产生的额外背景干扰。

其他生物液体（如细胞上清）：通过高重力离心或过滤去除残留细胞及碎片。推荐使用0.8 μm 过滤器（或 3000×g 离心），既能有效排除细胞物质，又能保留绝大多数外泌体；若使用 0.2/0.45 μm 过滤器（或 16000×g 离心），则会去除部分较大囊泡，需谨慎选择。

二、特殊样本处理：尿液 RNA 分析的 “避坑指南”

尿液中含有多种代谢物，可能干扰 RT-PCR 或 RNA 测序等分析。为确保结果准确，可针对性优化：

长短 RNA 分离：建议分别分离大于 200nt 的长链 RNA 和小于 200nt 的短链 RNA，避免相互干扰。短链 RNA 分离可使用 Reagent UI（QIAGEN, cat:77900）。

样本选择：优先使用晨尿样本，其成分更稳定，能减少分析波动。

三、外泌体纯化：膜亲和法让 RNA 分析更高效

外泌体纯化方法多样，但针对 RNA 研究，膜亲和法（如 QIAGEN exoEasy 系列） 优势显著：

表达谱更完整：不依赖外泌体的特定表位，而是利用其通用生化特征，回收样本中全谱外泌体，保留更全面的 RNA 信息。

操作更简便：通过膜亲和自旋柱技术，25 分钟即可完成纯化，下游可直接开展粒径分析、WB、电镜及 RNA 提取等实验。

一步式 RNA 纯化：升级的 exoRNeasy 系列可直接从样本中纯化外泌体 RNA，减少移液步骤，得率更高，1 小时内即可完成从样本到 RNA 的全流程。

（如图所示，exoRNeasy Midi/Maxi Kit 可在 1 小时内完成外泌体纯化与总 RNA 分离，大幅提升效率）

四、miRNA 定量：选对方法，结果更精准

外泌体 RNA 含量极低，常规分光光度计（A260）难以精准定量。推荐以下方法：

qRT-PCR：灵敏度高，尤其适合血浆、血清等微量样本的 RNA 定量。

荧光定量法 / 安捷伦 2100 生物分析仪：可直观反映 RNA 浓度和片段分布，辅助评估样本质量。

注意：RIN 值（RNA 完整性指数）通常不适用于外泌体或无细胞体液中的 RNA 评估，无需过度依赖。

五、内参选择：EVs 研究的 “校准神器”

在细胞或组织 RNA 检测中，U6 是常用内参，但在 EVs 中，其表达稳定性存疑。更推荐以下策略：

外参校准：添加外源性 miRNA（如 cel-miR-39-3p），与样本共同纯化，可有效监控提取、反转录等实验环节的效率。

专用试剂盒：QIAGEN RNA Spike-In Kit（cat:339390）包含预混的 UniSp2/4/5（用于 RNA 纯化对照）和 cel-miR-39-3p（用于 cDNA 合成对照），兼容 SYBR GREEN 和探针法 qPCR，让定量更可靠。

优宁维推荐工具：让外泌体 RNA 研究更高效

针对外泌体 RNA 研究的全流程，优宁维提供以下核心产品，助力科研提速：