活力满满活性蛋白2 | 原代细胞培养：从“休眠”到“活力”的复苏逻辑

成功的原代细胞培养，不在于“照搬配方”，而在于理解每一种因子背后的生物学逻辑。从“唤醒”到“扩增”再到“定向维持”，每一步都需要匹配细胞所处的生理状态。

原代细胞离体后，首先面临的是失去体内复杂细胞外基质（ECM）和旁分泌信号支持的“生存危机”。若无外源性生长因子干预，多数原代细胞会迅速启动凋亡程序。

在此阶段，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF/FGF2）扮演着至关重要的“唤醒者”角色，扮演着无可替代的“急救员”角色。它主要通过激活细胞内的MAPK/ERK等信号通路，发挥强大的促存活和促增殖作用。bFGF能有效抑制凋亡相关蛋白的表达，并驱动细胞重新进入生长周期，为后续的增殖打下基础。

当细胞初步存活后，下一步的关键是维持其健康增殖能力，避免过早衰老（senescence）。此时，表皮生长因子（EGF）的作用凸显。

EGF通过激活EGFR及下游PI3K/AKT和MAPK通路，显著提升细胞的分裂速率，并增强其对抗氧化应激和DNA损伤的能力。在多种上皮来源的原代细胞（如角质形成细胞、支气管上皮细胞）培养中，EGF是维持扩增潜能的标配因子。

当细胞开始稳定增殖后，我们必须防止它们在传代过程中“忘记”自己的身份，例如上皮细胞发生间质转化，或特化细胞失去功能表型。

1. 转化生长因子-β（TGF-β）

作用具有高度情境依赖性。在某些原代细胞（如肝细胞、肾小管上皮细胞）中，低浓度TGF-β可帮助维持分化状态；但在其他类型（如乳腺上皮、肺泡上皮）中，TGF-β反而可能促进EMT和纤维化。因此，是否添加TGF-β需根据细胞类型谨慎评估，不宜一概而论为“防止细胞忘记身份”。

2. 胰岛素样生长因子-1（IGF-1）

主要通过激活IGF-1R/PI3K/AKT通路，提供抗凋亡信号并调节葡萄糖摄取与蛋白质合成，是维持细胞代谢稳态的重要辅助因子。

3. 血管内皮生长因子（VEGF）

则主要用于血管内皮细胞、周细胞等血管相关原代细胞的培养，可促进其存活、迁移和管腔形成。对于非血管来源的细胞，VEGF通常非必需。

新手避坑提醒

误区一：以增殖速度为唯一标准。 长期暴露于高剂量促增殖因子（尤其是bFGF和EGF）下的细胞，虽数量庞大，却往往丧失原有功能标志物表达（如肝细胞的CYP450酶、神经元的突触蛋白），导致实验数据失真。

误区二：忽视试剂的批次差异。 原代细胞对细胞因子的批次稳定性极其敏感。不同批次间活性差异可能导致实验结果无法复现。因此，选择经过严格功能验证的高活性重组蛋白至关重要。