Texas Red maleimide（Texas Red Mal，德克萨斯红马来酰亚胺）是一种专门用于巯基（-SH）特异性标记的红色荧光探针，其分子结构在德克萨斯红（Texas Red）荧光母核的基础上，通过酰胺键将马来酰亚胺基团（-C4H3NO2）共价连接到分子侧链，形成“红色荧光母核-巯基反应基团”的功能结构。这种结构设计既保留了德克萨斯红优异的红色荧光性能（最大吸收波长595 nm，最大发射波长615 nm），又赋予了对巯基的高度特异性反应活性，能够实现对含巯基生物分子的精准、高效标记。从反应机理来看，马来酰亚胺基团中的碳-碳双键具有较强的亲电性，能够与巯基发生迈克尔加成反应，形成稳定的硫醚键（-S-C-），该反应具有极强的特异性，仅针对巯基发生反应，不与氨基、羟基、羧基等其他常见生物官能团相互作用，反应条件温和（室温、pH 6.5-7.5），无需催化剂，反应速率常数可达10⁴ M⁻¹s⁻¹，标记效率通常可达90%以上，且反应产物在生理条件下稳定性高，无逆反应发生。
理化性质方面，Texas Red maleimide的光学性能与Texas Red amine基本一致，荧光量子产率约为0.19，荧光亮度强，发射波长处于红色光区，适合用于多色荧光成像，与绿色、蓝色荧光染料无发射波长重叠，可实现多靶标同时标记。其水溶性表现优异，得益于德克萨斯红母核的磺酸基团和马来酰亚胺基团的轻微亲水性，在纯水中的溶解度可达5 mg/mL以上，在生理盐溶液、细胞培养液、血液等生物体液中均能稳定溶解，无聚集现象，有效避免了荧光淬灭。该化合物具有良好的化学稳定性，在pH 5.0-9.0的范围内，荧光强度和马来酰亚胺基团的反应活性稳定，无水解或降解现象；在37℃生理温度下储存1个月后，HPLC纯度仍可达95%以上。光稳定性方面，其在红色光照射下的荧光保留率可达85%以上，能够满足长时间成像实验的需求。细胞毒性方面，该化合物表现出低毒性，在常规实验浓度（1-10 μM）下，对HeLa、MCF-7、HUVEC等多种细胞系的存活率无明显影响，生物相容性良好，适合用于细胞内巯基生物分子的标记。
合成工艺上，Texas Red maleimide的制备核心是实现德克萨斯红与马来酰亚胺基团的高效、特异性连接，常用的合成路线为：第一步，以Texas Red amine（德克萨斯红胺）为起始原料，将其溶解于无水DMF中，加入三乙胺作为催化剂，调节反应体系pH至7.5-8.0；第二步，将马来酰亚胺-COOH溶解于无水DMF中，在缩合剂（如EDC、NHS）的作用下活化羧基，得到马来酰亚胺-琥珀酰亚胺酯活性中间体；第三步，将活化后的马来酰亚胺中间体缓慢滴加到Texas Red amine的DMF溶液中，在室温下避光反应，通过酰胺键将德克萨斯红与马来酰亚胺基团共价连接；第四步，采用柱层析（凝胶柱，洗脱剂为水/甲醇混合体系）和高效液相色谱（HPLC）进行纯化，去除未反应的Texas Red amine、马来酰亚胺-COOH、活化剂和副产物，最终得到高纯度（HPLC纯度≥98%）的目标产物。整个合成过程的关键在于控制缩合反应的选择性，避免马来酰亚胺基团的自身聚合和Texas Red amine的多取代反应，同时确保反应过程中德克萨斯红荧光母核的结构稳定，不影响其荧光性能。合成产率约为20-30%，主要受活化中间体的纯度和反应条件的控制。
