Western Blot实验的“预制菜”|中压稳、高压快、破除制胶玄学的BIS-TRIS预制胶

工欲善其事，必先利其器。对于 Western Blot（WB） 来说，一块制作完美的凝胶就是实验成功的基石，直接决定蛋白分离效果、条带质量与实验重复性，其重要性贯穿电泳、转膜、检测全流程。

一、传统手工制胶步骤

Western Blot（WB）实验中的手工制胶（自灌 SDS-PAGE）核心就是把“分离胶 → 浓缩胶 → 插梳子”三步在 1 h 左右完成，下面是整合后的通用实验步骤，可直接照做。

1. 玻璃板预处理

• 短玻板（带间隔条）与长玻板对齐，75 % 乙醇擦洗→去离子水冲→竖干。

• 组装后加 5 mL 去离子水，静置 5 min 检漏；不渗漏即可继续 。

2. 分离胶配制与灌胶（以 10 %、1.0 mm 厚凝胶为例）

分离胶混匀后沿长板中间匀速灌入，至短板下缘 1 cm 处；立即用去离子水（或 95 % 乙醇）封层，静置 25–30 min 至界面折线清晰。

3. 浓缩胶配制与插梳子

弃去水层，滤纸吸干。浓缩胶混匀后灌满，轻轻插入 10 孔或 15 孔梳子，避免气泡；室温聚合 15–20 min 。

4. 立即使用或暂存

放入装有电泳液中的自封袋中，4 °C 可存 1 周，但建议当天电泳以保证分辨率。

5. 关键提醒

• APS 必须新鲜（<1 周 4 °C），TEMED 量不可多加，否则胶脆且聚合过快。

• 灌胶后 30 min 内避免震动，温度波动会导致界面歪斜。

二、Western Blot（WB） 实验中的“好胶”之道

EnkiLIfe恩玑生命新推出中压稳、高压快、破除制胶玄学的BIS-TRIS预制胶，使用MOPS buffer或MES buffer，能更好实现中大分子量蛋白和小分子量蛋白的分离。且兼容市场上主流（bio-rad系列）的电泳槽，可直接用于PAGE电泳及Western blot检测，节省大量配胶时间，电泳时间，提高实验效率。

1. EnkiLIfe恩玑生命预制胶与传统手工胶对比

EnkiLIfe恩玑生命的预制胶可将整个电泳准备时间从1.5-2.5小时缩短至仅需30-45分钟！

2. EnkiLIfe恩玑生命预制胶使用流程

• 配制好MOPS电泳液或使用本公司20×通用型快速电泳液（RA10044）；

• 从包装袋中取出预制胶，揭掉胶板底部密封胶条；

• 从胶板中缓慢平稳推出梳子；

• 将预制胶短胶板朝内固定在电泳槽中；（若您的U型密封条顶部有突起结构，则需将密封条取出后反向安装，以使平滑面朝外）

• 向电泳槽内槽加入电泳缓冲液，使液面在点样孔上方5-7mm处，再向外槽加入1/3体积电泳缓冲液；

• 可用电泳缓冲液轻轻冲洗点样孔，以去除点样孔中气泡和残留的储存保护液；

• 将处理后的样品加入点样孔，启动电泳，电压调为140-160V，不超过200V ，约 30-45min即可完成电泳；

• 电泳结束后取出胶板，将撬具（镊子等铁片即可）插入胶板两侧的上、中、下三处，轻轻撬动至胶板两侧完全分开，将凝胶进行染色脱色处理后即可观察蛋白条带。

EnkiLIfe(恩玑生命)Western Blot实验全流程与产品解决方案：