高效液相色谱测定法三黄片中大黄素和大黄酚

仪器设备： 1 仪器

1.1高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按大黄素峰计应不低于2000。
1.3 紫外吸收检测器
2 色谱条件
2.1 流动相：甲醇 + 0.1%磷酸溶液= 85 + 15
2.2 检测波长：254nm
2.3 柱温：室温
试样制备： 1. 称取供试品
取本品20片，除去包衣，精密称定，求得每片平均重量，研细（过三号筛），精密称取适量（约相当于1片的重量）。
2. 对照品溶液的制备
分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇- 醋酸乙酯（2 ：1）制成每1 ml含大黄素0.01 mg、大黄酚0.025mg的混合溶液。 
3. 供试品溶液的制备
供试品置锥形瓶中，精密加乙醇25ml, 密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10 ：1）溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2 ：1）溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，为供试品溶液。 
注：“精密称定”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
本方法采用高效液相色谱法测定三黄片中大黄素和大黄酚的含量。
本方法适用于中成药三黄片。 
供试品加乙醇于水浴上加热回流，用乙醇补足减失的重量后，精密量取滤液，蒸干，加30%乙醇-盐酸置水浴中加热水解后，用氯仿提取，合并提取液，水浴蒸干，无水乙醇-醋酸乙酯溶解残渣，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素和大黄酚的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇
2.磷酸溶液（0.1%）
3.乙醇
4.无水乙醇
5.盐酸
6.醋酸乙酯
7 .氯仿
1. 称取供试品
取本品20片，除去包衣，精密称定，求得每片平均重量，研细（过三号筛），精密称取适量（约相当于1片的重量）。
2. 对照品溶液的制备
分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇- 醋酸乙酯（2 ：1）制成每1 ml含大黄素0.01 mg、大黄酚0.025mg的混合溶液。 
3. 供试品溶液的制备
供试品置锥形瓶中，精密加乙醇25ml, 密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10 ：1）溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4次，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2 ：1）溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，为供试品溶液。 
注：“精密称定”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，紫外吸收检测器，于波长254nm处测定大黄素（c15h10o5）和大黄酚（c15h10o4）的吸收值，计算出其含量。