HPLC法测定大黄相关制剂中大黄素的含量

 大黄为蓼科植物掌叶大黄(Rhrum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim．ex Bal1) 或药用大黄(Rheum officinale Bail1．)的干燥根及根茎【”。具有泻下攻积、清热泻火、止血、解毒、活血化瘀之功效。大黄中的主要药效成分为蒽醌类衍生物如 大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄酸等[21。清胰Ⅱ号是由大黄、栀子、赤芍、丹皮等中药研制的复方制剂。具有清热凉血、理气开郁、活血止痛、通理攻下的作用，用于治疗急性胰腺炎已有三十多年的临床经验p]。 经近上千多例急性胰腺炎，近上百例重症急性胰腺炎(SPA)的治疗、总结，收到较好的疗效，SPA的治愈率显著上升，达到国内领先水平。

1 材料与方法

1．1 药品试剂大黄素对照品(含量测定用，批号： 110756—200110中国药品生物制品检定所)，乙腈 (色谱纯，上海星可生化有限公司)，乙醇(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)，冰醋酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)，甲醇(色谱纯，上海星可生化有限公司)，高纯水。

1．2 仪器美国Agilent 1100高效液相色谱仪，包括紫外检测器和色谱工作站。Agilent Eclipse XDB C一18 (150x4．6mm，0．461xm)色谱柱。塞多利斯 BT125D电子天平(北京塞多利斯科学仪器有限公司)。

1．3 色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse‘XDB C一18 (150~4．6mm，0．46lxm)。以乙腈一0．1％冰醋酸溶液(50： 50)为流动相；检测波长为254nm，流速1．0ml／min，柱温为30℃，进样量20 l 。

1．4 溶液制备

1．4．1 对照品溶液的制备称取大黄素标准品 0．6mg，置于25ml的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至 25ml，配成0．024m~nl的大黄素标准液，置于4qC冰箱中保存。

1．4．2 清胰Ⅱ号供试品溶液的制备按照清胰Ⅱ号的配方称取原料[5】，将原料放在煎煮锅里进行煎煮(大黄、芒硝除外)。煮前快速浸泡5min左右，放干水，次日加入适量的水煎煮20min后，将已浸洗的大黄放人锅中，再酌加适量的水继续煎煮10rain，药液放出过滤，药渣加入适量的水继续煎煮，每次30分钟。药液过滤合并。将药液进行浓缩，用部分药液将芒硝溶解，合并药液，加入适量的苯甲酸钠至药液中，使至规定体积500 ml，使最后药液中苯甲酸钠的浓度为1．5％，搅拌均匀，备用。

1．4．3 清胰Ⅱ号对照品溶液的制备不加入大黄，按照清胰Ⅱ号供试品溶液的制备方法操作，其他步骤均相同，制得大黄的阴性对照品溶液，备用。
 

2 含量测定

2．1 测定波长的选择根据2005年版《中国药典》部附录V A的紫外可见分光光度法，扫描大黄素的吸收波长，扫描范围200 600nm，大黄素的吸收波长为254nm，与大黄药材含量测定项下的测定波长相一致，确定大黄素的测定波长为254nm。结果见图1。

2．2 系统适应性实验 以乙腈一0．1％冰醋酸溶液 (50：50)为流动相；检测波长为254nm，流速1．0ml／ rain，柱温为30cC，进样量20 l此条件下对照品、供试品在约12min时间均有一色谱峰，阴性对照品无干扰。见色谱图2。

2-3 线性关系的考察采用大黄素标准品溶液制得一系列梯度溶液，其浓度分别为1．2IX 、2．4 ml、4．8IXg／ha、7．2IXg／ml、9．6 g／ml、12．0IXg，IIll。按 2．2色谱条件进样2O 1，测大黄素对照品的峰面积，将浓度与峰面积进行线性回归处理，得出回归方程为：Y=72．638X+3 1．042，r=O．9999，大黄素对照品在 1．2 g／ml—l2．0 范围内样品浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2．4 精密度试验精密吸取大黄素对照品溶液(浓度为4．8 ~Jm1)2o l，按上述色谱条件，重复进样6 次，每次20 l，测定对照品中大黄素峰面积值，计算峰面积值的RSD为1．12％。说明仪器精密度良好。 2．5 稳定性试验精密吸取大黄素供试品溶液 2O ，按上述色谱条件，每隔两小时，测定供试品溶液中大黄素峰面积值，计算供试品大黄素峰面积值的RSD为1．72％。说明供试品在1Oh内稳定。

2．6 重复性试验取清胰Ⅱ号水提法提取液，称取 10．OOg，共6份，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容并超声30raint~，按上述色谱条件进行测定，测定结果经数据处理，平均含量14．137}Lg，g，RSD为0．29％。

2．7 加样回收率试验取本品(批号)共9份，每份重约5．Oog，置于25ml容量瓶中，分别精密加入大黄素对照品溶液(7．2 g／m1)8ml、lOmt、12ml。余下的量用甲醇补足，然后超声30min，冷却后，吸取2O l，测定峰面积计算回收率。结果见表l。

2．8  大黄素含量测定按照前文所述的方法和条件测试六批样品，并计算其含量。结果如表2。
 

3 讨论

本次实验采用高效液相色谱法对大黄素相关制剂清胰Ⅱ号汤剂中大黄素进行含量测定，与其他方法相比，具有操作简便，准确性好，灵敏度高，重现性好的特点，在制订大黄相关重要制剂的质量标准时，可以使用大黄素含量作为指标。