北京索莱宝科技有限公司

产品简介

衍生化主要是为了提高目标物质的可检测性，提高检测器对目标物质的响应。在弱碱溶液中，OPA和3-MPA能够与氨基酸中的羰基和氨基发生反应，生成衍生物并通过紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光。衍生物的荧光强度与其浓度成正比，从而可以计算出样品中氨基酸的含量。这种方法具有测定快速、准确度高、灵敏度高、适用范围广等优点。

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组分

实验步骤

一、实验前准备工作

1. 流动相A的配制：取适量的超纯水分别在瓶内溶解流动相A1、A2和A3，溶解后的流动相A1、A2和A3移至1L容量瓶中，并用适量的超纯水冲洗流动相A1、A2和A3的瓶壁1-2次并移至上述1L容量瓶中，以保证瓶内试剂充分被溶解移出，最后用超纯水将容量瓶定容至1L。混匀，过0.22 μm有机相膜后待用。

2. 流动相B的配制：取适量的超纯水在瓶内溶解流动相B，溶解后的流动相B移至1L容量瓶中，并用适量的超纯水冲洗流动相B的瓶壁1-2次并移至上述容量瓶中，然后加入400 mL的色谱级甲醇和400 mL的色谱级Y腈，最后用超纯水定容上述容量瓶至1L。混匀，过0.22 μm有机相膜后待用。

3. 将配制好的流动相A、B超声30 min，除去溶剂中的气体，防止阻塞色谱柱，影响实验结果。

4. 标准溶液的配制（标准品需用户自备）：取一定量氨基酸标准品，用0.1M HCl溶解为100 μg/mL或1mM的标准溶液，过0.22 μm水相膜。

5. 衍生试剂的配制：取60 mg试剂一加入0.5 mL试剂二、4.5 mL试剂三和50μL试剂四，混匀，避光待用。按此配制可以获得约5mL的衍生化试剂，可以进行25次手动衍生，实际操作时需根据具体需求等倍增加或减少配制量。

二、测定步骤

1. 开启电脑、打开液相色谱仪各模块开关按钮（使用 FLD 检测器），安装上 C18 色谱柱（4.6×250 mm，耐水性≥90%），打开软件，在方法组中设置柱温为 35℃，流速为 1 mL/min，激发波长（λex）为 340 nm，发射波长（λem）为 450 nm，洗脱程序如下表，走样时间 60 min，设置完毕保存方法组。

2. 进样前，需要用初始流动相平衡柱子，采用初始流动相（流动相A：流动相B=90:10）比例平衡色谱柱30 min或更久，待基线稳定后开始进样。

2.1 自动衍生（进样程序的设定）：吸取氨基酸标准溶液1 μL、2 μL衍生试剂（提前过好0.22 μm有机相膜）、2 μL试剂三（提前过好0.22 μm水相膜），空气中最大混合速度混合5次，等待1 min，进样。

2.2 若色谱仪没有自动衍生功能，可选用手动衍生操作：吸取氨基酸标准溶液100 μL加入200 μL衍生试剂和200 μL的试剂三，涡旋5次，每次30 s，静置1 min后过0.22 μm有机相膜，上样。

3. 实验需要同时做空白对照：即用等量0.1M HCl重复上述步骤，以排除干扰。

检测结果示例

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