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大肠杆菌拓扑异构酶IV（top4）是一种II型拓扑异异构酶，由大肠杆菌中的parC和parE两个基因编码。这种酶对大肠杆菌的脱链和染色体分离至关重要；因此，拓扑IV倾向于更喜欢分子间链传递（链式和脱链反应）而不是弛豫反应。EC拓扑异构酶IV也是喹诺酮类抗菌剂的靶标，喹诺酮类抗菌药通过将酶转化为DNA损伤剂来发挥作用。TopoGEN提供纯化的Top4，用于药物开发和筛选分析的各个方面。该酶在解链动基质DNA（kDNA）中非常活跃，但也会松弛超螺旋质粒DNA。然而，它在放松活动中不太稳健。根据Peng和Marians的方法纯化大肠杆菌拓扑异构酶IV。

艾美捷TopoGEN大肠杆菌拓扑异构酶IV：

编号：TG2000EC

分类：拓扑酶

标签：拓扑异构酶

包含材料：包含两部分的测定缓冲液和稀释缓冲液。

EC拓扑酶IV在干冰上运输，应储存在-70°C。我们还建议在首次解冻后分装酶。请注意，反复的冻融会导致活性损失。

拓扑异构酶IV质量控制测试：

Top4通过已发表的方法（2）过表达并纯化。每个亚基在SDS-PAGE上通过CB染色检测到单一条带。通过在优化的I型活性条件下对超螺旋DNA的松弛进行测定，评估了与拓扑异构酶I的交叉污染。在这些条件下，与pBR322孵育2小时后，未检测到任何松弛产物。

拓扑异构酶IV解链测定，EC拓扑酶IV，top4解链测定

拓扑异构酶IV测定条件

反应包含以下成分（20微升）：40 mM Tris-HCl（pH 7.5），6 mM MgCl2，10 mM DDT，100 mM 钾谷氨酸，40 uM ATP，50 ug BSA/ml，0.2 ug kDNA。反应在37°C下进行30分钟后，用SDS（1%）终止，随后用蛋白酶K消化（50 ug/ml，56°C下15分钟）。反应产物在含有0.5 ug/ml乙酰胺的1%琼脂糖凝胶上电泳（用手持紫外线灯监测以分辨解链产物），用蒸馏水脱色（室温下20分钟）并拍照。

TopoGEN大肠杆菌拓扑异构酶IV评论和引用：

Phillips JW, Goetz MA, Smith SK, Zink DL, Polishook J, Onishi R, Salowe S, Wiltsie J, Allocco J, Sigmund J, Dorso K, Lee S, Skwish S, de la Cruz M, Martin J, Vicente F, Genilloud O, Lu J, Painter RE, Young K, Overbye K, Donald RGK, Singh SB: Discovery of Kibdelomycin, A Potent New Class of Bacterial Type II Topoisomerase Inhibitor by Chemical-Genetic Profiling in Staphylococcus aureus.  Cell Chemistry and Biology 2011, 18: 955-965.  doi: 10.1016/j.chembiol.2011.06.011.

Peng, H., and Marians, K. (1999). DNA Topoisomerase Protocols Volume I; page 163.

作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。

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