原代气管上皮细胞传代防污染全流程要点

原代气管上皮细胞本身增殖能力弱、对污染耐受度极低，通过全环节闭环防控，可将污染发生率控制在5%以内。

🧫 生物安全柜与环境前置防控

操作前用10%次氯酸钠溶液全面擦拭生物安全柜内壁、台面和操作区，再用75%乙醇复擦一遍，避免残留腐蚀不锈钢柜体。

柜内物品摆放精简有序，不遮挡进风、出风格栅，保证层流气流正常循环，操作全程不打开安全柜外侧玻璃挡板。

每半年校准一次生物安全柜气流强度，每季度做一次全面消杀，避免柜内积尘藏污成为污染源。

🧪 试剂与耗材预质控

所有完全培养基、胰酶、PBS缓冲液等细胞级试剂，到货后先做37℃无菌预孵育48小时，确认无浑浊、无沉淀再使用。

一次性枪头、培养瓶、离心管等耗材，必须选择无菌辐照级产品，开包前检查包装无破损、无漏气，禁止使用过期耗材。

原代细胞专用的上皮培养基中，可按说明书添加低浓度双抗，降低分离和传代初期的细菌污染风险，高代次培养时再停用避免影响细胞状态。

⚙️ 传代操作无菌规范

传代前手部严格消毒，穿戴无菌手套、口罩、实验服，操作过程中手和非无菌物品绝对不越过安全柜内的无菌操作区。

所有试剂瓶口、离心管开盖后倾斜45°朝向酒精灯火焰内侧，不敞口长时间暴露在空气中，操作时尽量减少说话、大幅度动作。

枪头不触碰培养瓶口、台面等非无菌区域，一旦误碰立即更换新的无菌枪头，禁止继续使用。

🔍 常规污染排查与早发现

每次传代前镜下初筛：观察培养基无异常变黄、浑浊，无肉眼可见菌丝团，排除显性细菌、真菌污染。

高倍镜下精筛：无快速游动的细菌颗粒、无串珠状真菌菌丝，背景无支原体污染特有的“星空状”细颗粒。

每季度用qPCR法对细胞做支原体专项检测，该方法检测限可达64个菌体细胞，能在污染早期精准发现隐患，避免污染扩散。