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如何制备小鼠DNASE1L3的单克隆抗体

发布人:上海研生实业有限公司

发布日期:2026/6/25 14:12:10

小鼠DNASE1L3重组蛋白相关背景,制备该靶点单克隆抗体的核心流程如下:


1. 免疫动物

选用6-8周龄纯种BALB/C雌性小鼠,以纯化的小鼠DNASE1L3重组蛋白作为免疫原,与佐剂按1:1体积比乳化后进行免疫:首次免疫用完全弗氏佐剂,后续加强免疫用不完全弗氏佐剂,皮下注射,免疫周期约2个月,融合前3天加强免疫。


2. 细胞融合

无菌取免疫小鼠的脾脏制备脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞按比例混合,加入PEG诱导融合,用HAT选择性培养基培养,仅融合成功的杂交瘤细胞可存活增殖。


3. 筛选与克隆化

通过ELISA法筛选出能分泌抗DNASE1L3特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,用有限稀释法进行至少3轮克隆化,获得稳定分泌目标抗体的单克隆细胞株。


4. 大量制备

可选择两种方式生产抗体:体内诱生法将阳性细胞注射入小鼠腹腔,收集腹水获取高浓度抗体;体外培养法收集细胞上清液,后续对抗体进行纯化、鉴定特异性与纯度后即可投入使用。


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