ELISA检测之激素水平

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原-抗体特异性结合的免疫学检测技术，利用酶标记的抗体或抗原，通过酶催化的显色反应检测目标分子（如蛋白质、抗体、激素等）的存在和含量。

基本原理：

1、抗原-抗体特异性结合：利用抗体识别特定抗原，或抗原结合特定抗体。可以分为直接法、间接法、夹心法、竞争法；

2、酶标记和显色反应：结合特定酶（如辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP），通过底物反应产生可检测的颜色变化；

3、定量分析：通过比色法测定光吸收值，与标准曲线比较，计算待测物的浓度。

检测激素的ELISA试剂盒类型

样本处理：

血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或 4℃过夜，然后 1000×g离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于 2-8℃1000×g离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃℃保存，但应避免反复冻融。

组织匀浆：用预冷的 PBS （0.01M,pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织碎。将碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1：9 的重量体积比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于 5000×g离心 5~10 分钟，取上清检测。

细胞裂解液：贴壁细胞用预冷 PBS 轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 离心 5 分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用预冷PBS 清洗 3 次，每 1×10^6 个细胞中加入 150-200uL PBS 重悬（推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可适当减少 PBS 体积）并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于 2-8℃，1500×g 离心 10 分钟，取上清检测。

细胞培养上清：请 1000×g离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

其它生物液体：1000xg离心 20分钟，取上清即可检测。

ELISA试剂盒特点：

1、可测样本类型多：血清、血浆、组织、细胞培养上清等样本；

2、高准确度：回收率普遍在90%-115%之间；

3、高灵敏度：灵敏度达pg级别，R²大于99。

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