实验室实操：PCR鉴定试剂盒的常规复溶流程

在PCR鉴定试剂盒中，复溶通常指的是将冻干的试剂或成分通过添加一定量的溶剂（如超纯水、缓冲液等）重新溶解的过程。复溶时，需要严格按照试剂盒说明书上的指示进行，以确保复溶后的试剂浓度和活性符合实验要求。

PCR鉴定试剂盒的复溶步骤通常包括以下几个关键步骤，以确保试剂的有效性和实验的准确性：

复溶缓冲液处理

对于冻干粉型试剂（如ConviFlex™ RT-Taq Mix），需最大速离心5秒后加入260μl复溶缓冲液（2×Rehydration Buffer），室温静置5分钟，涡旋并离心5秒分装。分装后-18℃保存备用。

试剂解冻与配制

1、将试剂盒从-20℃冰箱取出，除酶组分外，其他试剂需室温静置10分钟融化‌。酶制剂需放置冰盒短暂解冻，完全融化后轻弹管壁混匀。

2、配制反应体系时，按说明书比例添加组分。例如25μl体系通常包含：2×TaqMix 12.5μl、引物各1μl、模板DNA 2μl，ddH₂O补足。若为多重PCR，引物总量不超过3μl。

混合

将冻干粉置于最大速离心机中，离心5秒钟，以确保冻干粉聚集在管底。然后，加入指定体积的复溶缓冲液（例如260μl），室温下静置5分钟，以便冻干粉充分溶解。

涡旋与离心

使用涡旋混合器轻轻摇匀，确保冻干粉完全溶解。随后，再次离心5秒钟，以去除任何可能存在的气泡或不溶物。

标记与记录

在每个分装的管上做好标记，记录复溶日期、时间、使用量等信息，以便追踪和记录。

检查澄清度

确保复溶后的溶液澄清透明，无沉淀物。如有沉淀，需再次离心去除。

使用前短暂离心

在使用前，对复溶液进行短暂离心，以确保所有成分均匀分布。

注意事项

1、操作全程需在冰上进行，避免反复冻融导致试剂失效。

2、复溶后试剂需分装保存，避免多次冻融影响稳定性。例如D-二聚体和FDP质控品复溶后建议分装冷冻保存（-20℃），可显著降低检测值下降速度。