HPLC测定消肿止痛散中大黄素的含量-上禾生物

消肿止痛散是湘西自治州民族中医院的院内制剂

由 大黄、黄柏、归尾、三百棒、懒篱笆等14味中药和民族药组 成，是我院骨伤科治疗跌打损伤性疾病的一种自制外用散 剂，经多年临床应用，该制剂具有活血祛瘀，消肿止痛之功 效，对各种扭伤、外伤肿痛等软组织损伤所引起的局部肿 胀疼痛有明显的疗效。该制剂现有质量控制标准中没有 定量控制指标。

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为更好地控制该制剂的内在质量，保证临 床疗效的稳定性，本文以该制剂中君药大黄的主要成分大 黄素为含量测定指标，采用高效液相色谱法对大黄中的大黄素进行含量测定，建立了消肿止痛散的质量控制标准， 现报道如下.

关键词：大黄素 大黄提取物 大黄 消肿止痛散

1 实验部分

1 1 主要仪器与试剂：Waters高效液相色谱系统，Wa— terx2487紫外检测器；大黄素标准品(中国食品药品生物制 品检定所)；消肿止痛散(批号20071011，20071218，本院 制剂室提供)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1．2 方法

1．2 1 色谱条件：伊特利一C18色谱柱(200mm ×4． 6mm，5psn)；流动相：甲醇一0 1％磷酸溶液(8o：20)；流速 为1 0ml／min，检测波长为430nm；柱温：室温；进样量： 10 L。

1 2 2 标准品溶液的配制：精密称取干燥至恒温的大黄 素标准品适量置50 ml容量瓶中，加甲醇制成含大黄素 14 8飕／ml的标准品储备液，备用。

1．2．3 样品溶液的配备⋯ ：精密称取消肿止痛散约0．5g， 置具塞三角瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超 声处理30 min，放置到室温，称定重量，用甲醇补足减失重 量，离心分离，取上清液以微孔滤膜(0．45／an)滤过，作为 样品溶液。

1．2．4 阴性对照品溶液的制备：按消肿止痛散的处方比 例及制备工艺制得缺大黄的阴性样品，按1．2．3项相同的 方法，制得阴性对照液。

1．2 5 标准曲线的绘制：精密量取标准品储备液(2．0．4 0、6．0．8．0、10．0)m1分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，即成浓度为(2．96、5．92、8．88、11．84、14．8) ml的标准品溶液，按上述色谱条件进样10／~L，以浓度(C) 为纵坐标，峰面积(A)为横坐标，绘制标准曲线。

1．2 6 样品测定：精密吸取样品溶液10止注入检测器， 以峰面积按标准曲线计算即得。

2 结果

2．1 标准曲线结果：大黄素：A=40754C一4410，r=0． 9996，在2 96vdml一14．8 ml范围内呈良好的线性关 系。

2 2 精密度试验结果：精密吸取标准品储备液(14．8 m1)10 L，重复进样5次，分别测定大黄素的峰面积，结果 峰面积基本一致，RSD=0．56％(n=5)，表明本法精密度 良好。

2 3 稳定性试验结果：精密吸取样品溶液(批号 20071218)，室温放置，分别于0,2、4、6、8h各进样1次，共 测5次，大黄素峰面积的RSD=0．65％(n=5)，表明样品 溶液在8h内稳定。

2．4 重复性试验：取同一批号样品(批号20071218)5份， 精密称定。分别按1．2．3和1 2 6项下样品溶液的制备和 测定方法进行测定，结果大黄素峰面积的RSD=1．28％(n =5)，表明本法重复性良好。

2 5 空白试验：取阴性对照品溶液，依上述色谱条件测 定。结果表明。其他成分对大黄素的测定无干扰。

2．6 回收率试验：采用加样回收法，取已知含量的消肿止 痛散(批号：20071218)5份，各约0．3g，精密称定，精密加 入一定量的标准品，分别按1．2．3和1．2．6项下样品溶液 的制备和测定方法进行测定，结果大黄素的平均回收率为 99．8％，RSD=0．2％ n=5)，结果表明本法具有良好的回 收率。回收试验结果见表1。

2．7 样品测定：按上述色谱条件对2批消肿止痛散样品 进行含量测定，结果见表2。

3 讨论

3．1 文献报道中药复方制剂大黄中大黄素测定有采用波 长254nm[ 和438 nml3 两种，由于本制剂组方中药味较 多，所含成分较复杂，通过预测验，确定检波长为430 nlTl， 克服了其他成分的干扰，获得了满意的结果。

3．2 大黄中大黄素的提取方法较多¨J，本实验采用超声 振荡法提取，方法简单方便，提取效果好。

3．3 流动相的PH值对实验有较大影响l5J，因为蒽醌类化 合物呈现弱酸性，在酸性条件下蒽醌类化合物的分离得到 明显改善，经多种流动相试验选择，最后确定为甲醇一0．1磷酸(80：20)，能避免干扰，使大黄素得到较好地分离。 3．4 消肿止痛散为中药复方制剂，成分较为复杂，采用高 效液相色谱法测定方中大黄所含大黄素的含量，结果表明 方法简单，重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。

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