FITC-NHS，5-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯

FITC-NHS（Fluorescein Isothiocyanate N-Hydroxysuccinimide Ester） 是一种常用于生物分子荧光标记的试剂，以下是对其的详细介绍：

一、基本信息

• 名称：FITC-NHS，也被称为绿色荧光素标记活性酯或异硫氰酸荧光素衍生物。

• 化学组成：由荧光素（FITC）与N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS酯）结合而成。

• 外观：通常为固体或粉末状。

• 溶解性：易溶于有机溶剂，如DMSO、乙醇、氯仿等。

结构式：

二、光学性质

• 激发波长：495 nm（也有说法为490 nm或494 nm，不同来源略有差异，但均接近500 nm）。

• 发射波长：515-520 nm（绿色荧光）。

• 荧光特性：FITC-NHS中的FITC基团具有明亮的绿色荧光，易于通过荧光显微镜或其他荧光成像设备观察和记录。

三、反应特性

• 活性酯：NHS酯是一种常用的活性酯，可以与氨基（$N{H}_2$）反应形成稳定的共价结合（氨基酰化产物）。

• 标记原理：FITC-NHS通过其NHS酯部分与生物分子（如蛋白质、抗体、肽等）中的氨基反应，将荧光素分子共价地连接到生物分子上，从而实现荧光标记。

四、应用领域

1. 生物分子标记：

• 蛋白质标记：用于标记蛋白质，以便在实验中追踪和检测蛋白质的位置和相互作用。

• 抗体标记：标记抗体，用于免疫荧光染色或流式细胞术等实验。

• 核酸标记：与炔基修饰的DNA/RNA结合（需通过其他化学方法引入炔基），用于荧光原位杂交（FISH）等实验。但更常见的是直接标记含氨基的核酸适配体或修饰后的核酸。

2. 细胞成像：

• 活细胞标记：利用FITC-NHS标记细胞表面蛋白或细胞内蛋白，实现活细胞内生物分子的动态追踪。

• 固定细胞标记：与炔基修饰的抗体结合（若抗体已通过其他方法标记炔基），用于固定细胞的免疫荧光染色。但更直接的应用是直接标记含氨基的细胞结构蛋白。

3. 生物传感器：

• 荧光探针：构建基于FITC-NHS的荧光探针，用于检测金属离子、小分子或蛋白质等。

• 高灵敏度检测：利用FITC的高荧光量子产率，实现低浓度生物分子的检测。

五、储存与使用条件

• 储存条件：通常需要在-20℃下冷藏保存，以保持其稳定性和荧光强度。同时，应避光、防潮，并避免频繁解冻和冷冻。

• 使用条件：FITC-NHS可在水性缓冲液中直接与生物分子反应，无需添加有机溶剂。反应通常在碱性pH条件下进行，以提高NHS酯与氨基的反应效率。

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