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FITC-OVA,FITC-卵清蛋白,异硫氰酸荧光素标记卵清蛋白

发布人:陕西星贝爱科生物科技有限责任公司

发布日期:2025/8/20 16:32:46

基本信息

FITC(异硫氰酸荧光素):一种绿色荧光染料,广泛用于基于荧光的测定和成像研究中。

OVA(卵清蛋白):一种来源于鸡蛋清的优质蛋白质,占蛋清蛋白总量的54%~69%。它

激发波长:约495nm。

发射波长:约519-520nm,发出绿色荧光。

荧光稳定性:FITC-OVA在生理条件下(如37℃,pH 7.4)保持强荧光,半衰期超过72小时。但FITC的荧光易受pH影响,建议在pH 7-9环境下使用,以防止荧光淬灭。

制备方法

  1. FITC活化:将异硫氰酸荧光素(FITC)与碱性溶液(如碳酸氢钠缓冲液)混合,生成活化的FITC。这一步骤是FITC标记反应的关键,因为活化的FITC更易于与蛋白质分子中的氨基等活性基团发生反应。

  2. 蛋白活化:使卵清蛋白(OVA)暴露出反应性基团,通常是氨基基团。这可以通过调整溶液的pH值或使用化学试剂来实现,以确保OVA分子中的氨基基团处于反应活性状态。

  3. 偶联反应:将活化的FITC与活化的卵清蛋白在适宜的缓冲液(如PBS)中混合,进行反应以促进FITC与OVA的结合。反应条件通常包括适宜的pH值(一般为7.4)和温度(一般为室温或37℃),反应时间通常为1-2小时。在这个过程中,FITC与卵清蛋白分子中的赖氨酸残基上的氨基发生共价结合,形成稳定的荧光复合物。

  4. 纯化:通过透析、超滤、柱层析或其他方法去除未反应的FITC和其他小分子杂质,以得到纯化的FITC-OVA。纯化步骤对于确保标记产物的质量和纯度至关重要。

  5. 表征和存储:使用紫外-可见光谱、荧光光谱、质谱及其他技术对合成的FITC-OVA进行表征,以确认其结构和纯度。FITC-OVA应储存在阴凉、干燥、避光的环境中,通常建议在-20℃或以下温度保存,并避免反复冻融,以保持其荧光性质和化学稳定性。

应用方向

应用 说明
✅ 抗原摄取研究
- 追踪树突状细胞、巨噬细胞对 FITC-OVA 的内化过程<br>- 流式细胞术定量分析阳性细胞比例
✅ 共聚焦显微镜成像
- 观察抗原在细胞内的定位(如早期内体、溶酶体)
✅ T 细胞活化实验
- 与 OT-I 或 OT-II T 细胞共培养,研究 TCR 激活与增殖
✅ 疫苗佐剂筛选
- 比较不同佐剂对 OVA 摄取和迁移至淋巴结的能力
✅ 体外抗原呈递实验
- 检测 MHC-I 和 MHC-II 分子对 OVA 肽段的呈递效率

关于我们:
陕西星贝爱科生物科技经营的产品种类包括有:合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记物、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯,二氧化硅及介孔二氧化硅,聚合物微球,近红外荧光染料,聚苯乙烯微球,上转换纳米发光颗粒,MRI核磁造影产品,荧光蛋白及荧光探针等等。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体!
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