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HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱

发布人:上海弘顺生物科技有限公司

发布日期:2025/5/19 10:08:28

"HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱
【操作规范】
在细胞培养和处理过程中,需严格遵守无菌操作规范,以避免细胞污染和交叉污染。
【消化条件】
室温下用胰酶消化1-3分钟。
【生物安全等级】
1级。
【形态特性】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱上皮细胞样
【HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱英文别名】
HT 29; HT29
【背景信息】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱该细胞是1964年由FoghJ用移植培养方法和含15%FBS的F12培养从原发性肿瘤分离的。近来,已建株的培养细胞用含血清的McCoy's5a培养基培养。该细胞系在裸鼠中成瘤,也能在类固醇处理的地鼠中成瘤。该细胞可合成IgA、A、TGFβ结合蛋白和黏素;表达尿激酶受体,但没有检测到血浆酶原活性;不表达CD4,但细胞表面表达半乳糖神经酰胺(HIV的可能替代受体)。该细胞系癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos阳性;p53基因过表达,并且在273位密码子处发
传代细胞培养是细胞生物学研究中的基础技术,其成功与否直接影响实验结果的可靠性。在操作过程中,细胞的消化时间和浓度控制尤为关键。消化时间过短会导致细胞难以从培养瓶壁脱落,影响后续传代效率;而消化时间过长则可能造成细胞膜损伤甚至死亡。研究表明,细胞的最佳消化时间通常控制在1-3分钟,具体需根据细胞状态和培养条件进行调整。消化浓度方面,当使用较高浓度(0.25%胰酶-EDTA)时,消化时间应缩短至1-2分钟;若使用较低浓度(0.05%),则需延长至3-5分钟。建议在显微镜下密切观察细胞形态变化,当细胞间隙增大、边缘回缩时立即终止消化。
细胞代谢随温度降低而逐渐减慢。当温度降至冰点以下时,细胞内的游离水会形成冰晶,导致细胞膜和细胞器结构的机械损伤,最终引发细胞死亡。然而,通过添加冷冻保护剂(如二甲亚砜或甘油),可以显著提高细胞在深低温环境下的存活率。这些保护剂能够降低冰晶的形成概率,并减少低温对细胞结构的破坏。
【换液周期】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱每周2-3次
【产品包装】
复苏发货:HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱T25培养瓶(一瓶)或冻存发货:1ml冻存管(两支)
【物种来源】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱来源于人源、鼠源等其它物种来源
【培养条件】
37°C、5%CO₂、饱和湿度环境,使用含10%-20%FBS的基础培养基。
【生长特性】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱贴壁生长
【污染检测】
支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。
【细胞接收流程】
收到细胞后,应首先观察细胞状态,然后进行75%酒精消毒处理。将细胞置于37℃培养箱中放置2-4小时以稳定HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱状态。当细胞密度达到80%-90%时,即可进行首次传代培养。
【消化传代】
使用0.25%胰酶-EDTA溶液,37°C孵育1-2分钟,轻拍培养瓶促进细胞脱落。(悬浮细胞可省略这步操作)
【传代比例】
1:2-1:4(HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱首次传代建议1:2)
【来源说明】
HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱主要来源ATCC、ECACC、DSMZ、RCB等细胞库
【污染防控】
严格无菌操作,定期检测支原体污染,必要时使用双抗预防细菌污染。
在实际应用中,不同细胞系需要定制化的冻存方案。例如,悬浮细胞比贴壁细胞更易冻存;原代细胞比永生化细胞系更脆弱;某些特殊细胞株可能需要特殊的保护剂组合。实验室间的细胞交换更凸显标准化冻存流程的重要性。国际细胞库提供的标准操作流程值得借鉴,包括使用无血清冻存培养基、严格控制降温速率等细节。统计表明,采用标准化冻存流程可使细胞复苏存活率提升至90%以上,而随意操作可能导致存活率不足50%。
细胞解冻过程同样需要谨慎操作。快速解冻(如37°C水浴)是常规方法,但解冻后未及时洗涤或离心步骤不当可能导致细胞损伤。对于某些敏感细胞,解冻后直接接种可能更有利于其恢复。此外,冷冻细胞若在–80°C保存过久,细胞膜和内部结构可能因冰晶形成而受损,因此长期保存应使用液氮。
【培养观察】
定期观察HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱生长状态,注意培养基的pH值变化和细胞密度,及时换液和传代。
【细胞复苏】
复苏细胞时,应快速将冻存管从液氮中取出并置于37℃水浴中解冻,然后转移到含新鲜培养基的无菌管中并吹打混匀。整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成,以确保细胞的高存活率。
【细胞传代】
传代时,应使用适量的胰蛋白酶溶液进行消化,并在显微镜下观察细胞消化情况。消化下来的细胞容易成团,需要吹打吹散。传代后,应确保细胞均匀分布在培养瓶或培养皿中。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。一般使用冻存液进行冻存,并置于液氮中储存。
【细胞状态】
传代和消化过程中,应密切关注细胞状态,避免过度消化或机械损伤导致细胞活性下降。
【空泡现象】
在密集培养时,细胞中可见巨大的空泡,这是细胞的正常特性,无需担心。
【血清比例】
使用10%-20%的血清浓度有助于优化HT-29 Cells人结肠癌细胞复苏率高|STR图谱实验条件,提高实验的重复性和稳定性。这一浓度范围经过多年实验和实践的验证,被认为是较为适宜的选择。
细胞传代准备工作:预热培养基和PBS:在开始传代前,将完全培养基和磷酸盐缓冲液(PBS),预热至37℃,以确保细胞在操作过程中不会受到温度冲击。准备无菌器材:包括无菌吸管、移液枪、离心管、培养皿、胰蛋白酶(或EDTA)溶液、完全培养基等。检查细胞状态:在显微镜下观察细胞的生长密度和形态,确保细胞处于对数生长期且状态良好。
标准复苏流程包括:快速解冻:将冻存管从液氮中取出后立即置于37℃水浴,持续摇动直至仅剩少量冰晶(通常需1-2分钟),梯度稀释:将细胞悬液缓慢加入预热的完全培养基(含10%血清),逐步降低DMSO浓度离心清洗:1000rpm离心5分钟去除冻存保护剂,重悬接种:按适当密度接种于预处理好的培养器皿。
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