OVCAR-8细胞：人卵巢癌细胞系

"OVCAR-8细胞：人卵巢癌细胞系
细胞背景资料：卵巢癌；女性
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
贴壁细胞冻存注意事项：细胞冻存液需提前配制，不可直接将DMSO加入细胞悬液中；不同细胞消化时间有差异，以实际镜检结果为准，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，消化时间不宜过长；应选择汇合度80%-90%左右，细胞处于对数生长期时进行冻存操作，确保细胞冻存时状态，冻存密度可根据细胞特性进行调整；冻存细胞保存温度应低于-130℃，不可在-80℃长期保存。贴壁细胞冻存操作步骤：从培养箱中取出准备冻存的细胞；显微镜下观察细胞状态并拍照记录；酒精消毒培养瓶后放入安全柜中；吸去多余的培养基，加人2~3ml(PBS缓冲液)润洗一次；加入1ml胰酶，放入37℃消化；消化1min左右，在显微镜下观察细胞消化情况；消化完全后，加3ml完全培养基终止；将细胞悬液移入15ml离心管中离心，1000rpm/min（约200g）离心3-5min；吸去多余的液体，向细胞沉淀中加入适量的冻存液，轻轻吸打混匀；按比例分装至冻存管中；贴好标签后放入梯度冻存盒中；将冻存盒放入-80℃，降温过夜后，移入液氮中保存。贴壁细胞冻存实验准备事项：将15mL离心管、冻存管、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒灭菌；细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、细胞冻存液等从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用；程序降温盒复温至室温备用。
细胞培养基应用选择：选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(１)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。(２)其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(３)根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI１６４０。(４)用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。以下是部分细胞常用的培养条件：２９３人胚胎肾细胞培养条件：MEM,１０%热灭活马血清；IMR-９０人肺成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；W１-３８人胚胎肺成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；A５４９人肺癌上皮细胞培养条件：F-１２K,１０%胎牛血清；A４３１人表皮癌细胞培养条件：DMEM,１０%胎牛血清；BHL-１００人乳房上皮细胞培养条件：McCoy'５A, １０%胎牛血清；BeWo人绒毛癌上皮滋养层细胞培养条件：F-１２K,１５%胎牛血清；Caco-２人结肠腺癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；Chang人肝脏上皮细胞培养条件：BME,１０%小牛血清；HCT-１５人结肠直肠腺癌上皮细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；HEp-G２人肝细胞癌上皮细胞培养条件：MEM,１０% 胎牛血清和NEAA；HEp-２人喉癌上皮细胞培养条件：MEM,１０% 胎牛血清;或RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；HT-２９人结肠腺癌上皮细胞培养条件：McCoy'５A,１０%胎牛血清；JEG-２人绒毛膜癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；KB人口腔癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；Saos-２人骨肉瘤上皮细胞培养条件：McCoy'５A,１５%胎牛血清；WI-３８人胚胎肺上皮细胞培养条件：BME,１０%胎牛血清；WISH人羊膜上皮细胞培养条件：BME, １０%胎牛血清；HUVEC人脐带内皮细胞培养条件：F-１２K,１０%胎牛血清和肝素１００ug/ml；IM-９人骨髓瘤成淋巴细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；Daudi人淋巴瘤细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；Clone M-３小鼠黑素瘤上皮细胞培养条件：F-１０,１５%马血清和２.５%胎牛血清；BHK-２１仓鼠肾成纤维细胞培养条件：GMEM,１０%胎牛血清或MEM,１０%胎牛血清和NEAA；CHO-K１仓鼠卵巢上皮细胞培养条件：F-１２,１０%胎牛血清；IEC-６大鼠正常小肠上皮样培养条件：DMEM,５%胎牛血清,胰岛素０.１μg/ml；COS-１猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；COS-３猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；COS-７猴非洲绿猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清
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