KPL-1细胞：人乳腺癌细胞系

"KPL-1细胞：人乳腺癌细胞系
细胞背景资料：浸润性导管癌；女性
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
细胞传代注意事项：①传代培养时注意无菌操作并防止细胞间的交叉污染。所有操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每种细胞使用一套器材；②每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代；③如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BBS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗生素，并经常更换培养基。传代细胞的建系和维持：细胞系的维持通过换液传代再换液、再传代和细胞种子冻存来实现。对每一个细胞系来说都有其自身的特点，要做好建系的维持必须记录好细胞档案,换液传代和做好细胞系的管理工作。培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。
细胞培养基应用选择：选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(１)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。(２)其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(３)根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI１６４０。(４)用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。以下是部分细胞常用的培养条件：２９３人胚胎肾细胞培养条件：MEM,１０%热灭活马血清；IMR-９０人肺成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；W１-３８人胚胎肺成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；A５４９人肺癌上皮细胞培养条件：F-１２K,１０%胎牛血清；A４３１人表皮癌细胞培养条件：DMEM,１０%胎牛血清；BHL-１００人乳房上皮细胞培养条件：McCoy'５A, １０%胎牛血清；BeWo人绒毛癌上皮滋养层细胞培养条件：F-１２K,１５%胎牛血清；Caco-２人结肠腺癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；Chang人肝脏上皮细胞培养条件：BME,１０%小牛血清；HCT-１５人结肠直肠腺癌上皮细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；HEp-G２人肝细胞癌上皮细胞培养条件：MEM,１０% 胎牛血清和NEAA；HEp-２人喉癌上皮细胞培养条件：MEM,１０% 胎牛血清;或RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；HT-２９人结肠腺癌上皮细胞培养条件：McCoy'５A,１０%胎牛血清；JEG-２人绒毛膜癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；KB人口腔癌上皮细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清和NEAA；Saos-２人骨肉瘤上皮细胞培养条件：McCoy'５A,１５%胎牛血清；WI-３８人胚胎肺上皮细胞培养条件：BME,１０%胎牛血清；WISH人羊膜上皮细胞培养条件：BME, １０%胎牛血清；HUVEC人脐带内皮细胞培养条件：F-１２K,１０%胎牛血清和肝素１００ug/ml；IM-９人骨髓瘤成淋巴细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；Daudi人淋巴瘤细胞培养条件：RPMI-１６４０,１０%胎牛血清；Clone M-３小鼠黑素瘤上皮细胞培养条件：F-１０,１５%马血清和２.５%胎牛血清；BHK-２１仓鼠肾成纤维细胞培养条件：GMEM,１０%胎牛血清或MEM,１０%胎牛血清和NEAA；CHO-K１仓鼠卵巢上皮细胞培养条件：F-１２,１０%胎牛血清；IEC-６大鼠正常小肠上皮样培养条件：DMEM,５%胎牛血清,胰岛素０.１μg/ml；COS-１猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；COS-３猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清；COS-７猴非洲绿猴肾成纤维细胞培养条件：MEM,１０%胎牛血清
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