hTERT-HPNE细胞：人胰腺导管上皮细胞系

"hTERT-HPNE细胞：人胰腺导管上皮细胞系
细胞背景资料：胰腺导管；HGNC-TERT转化；男性
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，特别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。
细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有３５L和５０L两种。使用时要注意以下几点：(１)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-１９６℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(２)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(３)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(１２１°C蒸气高压消毒)，２mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０６～１×１０７/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞复苏基本方法：１．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。２．迅速放入盛有３６℃～３７℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。３．剪开纱布口袋，取出安剖，用７０％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加１０ml培养液，吹打使细胞悬浮。４．低速离心（５００～１０００转/分）５分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。５．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。收到T２５ flask细胞时，处理方式为：在寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T２５ flask均加满培养基。请检查flask外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。将原封之T２５ flask静置于３７°C，５%CO２培养箱中，使细胞回温至３７°C，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用)，仅留约５-１０ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。
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