MIHA细胞：正常人肝细胞系

"MIHA细胞：正常人肝细胞系
细胞背景资料：肝
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
培养细胞真的不难，最关键几点：１)所有的东西使用，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；２)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；３)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；５)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；６)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?１)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；３)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；４)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；５)晚上离开的时候给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；６)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-７０℃~-１９６℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-７０℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过０~２０℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，３７℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。１ml冻存细胞使用１０~２０ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在３×１０(５)活细胞/ml；培养细胞１２到２４小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，３７℃水浴中快速融化；把１到２ml冻存细胞加入到大约２５ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约８０x离心２到３分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为３×１０(５)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约１０１２个，可以区分为２００多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G１期开始时一个确定的点G０点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
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