NTERA-2细胞：人恶性多发性畸胎瘤细胞系

"NTERA-2细胞：人恶性多发性畸胎瘤细胞系
细胞背景资料：畸胎瘤；男性
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：１)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加２-３ml ０.２５%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在１-２min)；２)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；３)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；４)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周２-３次)，待细胞密度达到８０%以后重复１项操作或者冻存；特别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)１)收到细胞后请尽快更换为含１５%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加１０%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过７２小时)；２)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径６cm的培养皿进行传代培养；３)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。
贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。一种简单的消化传代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，弃之，再加入适量胰酶作用１０s-４０s(根据细胞消化的难易程度)，弃之，这样依赖残余的胰酶就可将细胞消化单细胞。对于较难消化的细胞，可以用２%利多卡因消化５-８分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把旧培养液吸的干净一点，直接加酶消化应该不会有什么问题。弃培养液后，用０.０４%的EDTA冲洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室温孵育５min，弃取大部分EDTA，加入与剩余EDTA等量的胰酶(预热)总体积１/１０v。消化到有细胞脱落。不过有人说EDTA对细胞不好，有证据吗？培养的BASMC：倒掉旧培养液加入少量胰酶冲一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶约６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入适量新培养基中和，并分瓶这种方法简单、省事；效果很好并且不损失细胞！
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培养基；包含１０%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%甘油的新鲜培养基或５０%细胞条件培养基和５０%含有１０%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：５０%细胞条件无血清培养基和５０%包含有７.５%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有７.５%二甲基亚砜和１０%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约２００～４００g离心５分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以１×１０(７)到５×１０(７)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约２００g离心５分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。以５×１０(６)到１×１０(６)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入４℃冰箱中，５分钟内开始冷冻步骤。细胞以１℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
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