石蜡切片的苏木精-伊红HE染色详解

苏木精-伊红染色方法，简称HE染色方法，是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断，教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。
    （一）HE染色的基本原理

    1．细胞核染色的原理

    细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精硷性染料以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

    2．细胞浆染色的原理

    细胞浆内主要成分是蛋白质，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。

    随着科学技术快速发展和电子计算机的广泛应用，染色自动仪器的出现，许多实验室已用全自动染色机代替人工染色。

    （二）人工操作苏木精伊红染色方法

    1．染色步骤

    二甲苯I脱蜡10min.

    二甲苯II脱蜡5min。

    无水乙醇洗去二甲苯1min×2次。

    95%酒精1min。

    90%酒精1min。

    85%酒精1min。

    自来水洗2min。

    苏木精染色1min至5min。

    自来水洗1min。

    1%盐酸酒精分化20s。

    自来水洗1min。

    稀氨水（1%）反蓝30s。自来水洗或蒸馏水洗1min。

    伊红染色20s至5min。

    自来水洗30s。

    85%酒精脱水20s。

    90%酒精30s。

    95%I酒精1min。

    95%II酒精1min。

    无水乙醇I 2min。

    无水乙醇II 2min。

    二甲苯I 2min。

    二甲苯II 2min。

    二甲苯III 2min。

    中性树胶或加拿大树胶封片。

    2．染色结果

    细胞核呈蓝色，细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。

（五）染色液的配制

    1．苏木精（素）

    苏木精是一种纯天然染料，是从苏木素树提炼出来的，苏木树主产墨西哥的坎偑切，苏木精的染色性能差，经过一百多年精心加工配制，现用的苏木精配方，染色性能好，保持时间长，是世界上唯一的常规细胞核染料，

    2．苏木精的配制

    苏木精的配方很多，可根据不同需要选用，Harris配方最常用。

    （1）Harris苏木精的配制

    苏木精1g

    硫酸铝钾15g

    无水乙醇10ml

    蒸馏水200ml

    先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。

    （2）Mayer苏木精改良配法

    A液

　    苏木精2g

　    无水乙醇40ml

    B液

　    硫酸铝钾100g

　    蒸馏水600ml

　    稍加热使硫酸铝钾在水中溶解，将苏木精溶于酒精中，再将A液与B液混合煮沸2min。用蒸馏水补足600ml，加入400mg碘酸钠充分混匀，苏木精染液呈紫红色。

    （3）Gill改良苏木精染液的配制

      苏木精2g

      无水乙醇250ml

      硫酸铝钾17g

      蒸馏水750ml

      碘酸钠0.2g

      冰醋酸20ml

    先将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合，加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色，再加入冰醋酸。

    3．伊红溶液的配制

    （1）水溶性伊红

      伊红Y0.5－1g

      蒸馏水100ml

    先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤，每100ml加冰醋酸1滴。

    （2）乙醇性伊红液的配制

      伊红Y 0.5～1g

      90%酒精100ml

    先将伊红溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后不可经水洗直接用85%酒精脱水。

    4．盐酸酒精分化液的配制

　    浓盐酸0.5～1ml

      75%酒精99ml

    此液用一段时间后需要延长或更换液体，新液分化时间要短