上海阿拉丁生化科技股份有限公司

        使用血细胞计数器进行细胞计数是体外和体内实验的基石。它可以提高您研究的精确度和可重复性，并提高结果的可靠性。无论您的研究重点是微生物学、血液学、肿瘤学还是其他疾病，如果涉及细胞培养，则使用血细胞计数器进行准确的手动计数至关重要。

        该方案涵盖了如何使用血细胞计数器进行细胞计数，从准备样品到使用台盼蓝染色计算细胞活力，以便您可以放心地使用实验中的血细胞计数器。

第 1 阶段   准备血细胞计数器

1.如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洗。用水润湿盖玻片并固定在血细胞计数器上。

2.如果使用一次性血细胞计数器，只需在使用前从包装中取出即可。

第 2 阶段   制备细胞悬浮液

表 1. 胰蛋白酶消化贴壁细胞所需的DPBS和胰蛋白酶-EDTA的量。

实验步骤

1.轻轻旋转培养瓶，确保细胞分布均匀。

2.在细胞沉淀之前，用5 mL无菌移液器取出0.5 mL细胞悬浮液，放入EP微量离心管中。

3.取100 µL细胞放入新的EP离心管中，并添加400 µL 0.4%台盼蓝（最终浓度0.32%），轻轻搅拌。

第3阶段   计数

实验步骤

1.使用移液器吸取100 µL经台盼蓝处理的细胞悬浮液，加入血细胞计数器中。

        如果使用玻璃血细胞计数器，则非常轻柔地将盖玻片下方的两个腔室填充，以便通过毛细管作用将细胞悬浮液抽出。

        如果使用一次性血细胞计数器，将细胞悬浮液吸入计数室的孔中，利用毛细管作用将其吸入内部。

2.使用显微镜，用10×物镜聚焦于血细胞计数器的网格线。

3.使用手动计数计数器，计数一组16个方格中未染色的活细胞（活细胞不吸收台盼蓝）（图 1）。

        计数时，采用固定规则进行计数，如“记上不记下，计左不记右”。

        按照同样的指导原则，如果需要，也可以对用台盼蓝染色的死细胞进行计数，以评估其活力。

        图 1. 血细胞计数器图表显示了其中一个用于计数的16方格组（大方格，容积为1 mm3，0.1 μl）。

4 .将血细胞计数器移至下一组16个角方块并继续计数，直至所有4组16个角均计数完毕。

第4阶段   细胞活力

1、计算活细胞数/mL

        从每组16个角方块中取出平均细胞数，乘以10,000（104），再乘以5，以校正添加台盼蓝后的1:5稀释度，最终值为原始细胞悬液中活细胞数/mL。

        例如，如果16个方格中的每个方格的单元格数量分别为 54、42、49、56，则平均单元格数量为：

        (54 + 42 + 49 +56) ÷ 4 = 50.25

        50.25 × 10,000 (104 ) = 502,500

        原始细胞悬浮液中502,500 × 5 = 2,512,500个活细胞/毫升

2、计算细胞活力

        如果记录了每组16个角方块的活细胞和死细胞数量，则可以计算出估计活力。

        将活细胞数和死细胞数相加，得到总细胞数，再将活细胞数除以总细胞数，计算出细胞活力。

​​        计算公式为：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）

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