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【阿拉丁】利用血细胞计数器计数细胞法

发布人:上海阿拉丁生化科技股份有限公司

发布日期:2025/1/21 11:08:41

利用血细胞计数器计数细胞法

 

 

        使用血细胞计数器进行细胞计数是体外和体内实验的基石。它可以提高您研究的精确度和可重复性,并提高结果的可靠性。无论您的研究重点是微生物学、血液学、肿瘤学还是其他疾病,如果涉及细胞培养,则使用血细胞计数器进行准确的手动计数至关重要。

 

        该方案涵盖了如何使用血细胞计数器进行细胞计数,从准备样品到使用台盼蓝染色计算细胞活力,以便您可以放心地使用实验中的血细胞计数器。

 

第 1 阶段   准备血细胞计数器

 

1.如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片,请在使用前用酒精清洗。用水润湿盖玻片并固定在血细胞计数器上。

 

2.如果使用一次性血细胞计数器,只需在使用前从包装中取出即可。

 

 

第 2 阶段   制备细胞悬浮液

 

表 1. 胰蛋白酶消化贴壁细胞所需的DPBS胰蛋白酶-EDTA的量。

T-flash(cm2)

DPBS (mL)

胰蛋白酶-EDTA(mL)

含有FBS的培养基,用于中和胰蛋白酶的消化作用

25

2

2

6

80

3

3

9

175

5

5

15

 

实验步骤

 

1.轻轻旋转培养瓶,确保细胞分布均匀。

 

2.在细胞沉淀之前,用5 mL无菌移液器取出0.5 mL细胞悬浮液,放入EP微量离心管中。

 

3.取100 µL细胞放入新的EP离心管中,并添加400 µL 0.4%台盼蓝(最终浓度0.32%),轻轻搅拌。

 

 

第3阶段   计数

 

实验步骤

 

1.使用移液器吸取100 µL经台盼蓝处理的细胞悬浮液,加入血细胞计数器中。

 

        如果使用玻璃血细胞计数器,则非常轻柔地将盖玻片下方的两个腔室填充,以便通过毛细管作用将细胞悬浮液抽出。

        如果使用一次性血细胞计数器,将细胞悬浮液吸入计数室的孔中,利用毛细管作用将其吸入内部。

 

2.使用显微镜,用10×物镜聚焦于血细胞计数器的网格线。

 

3.使用手动计数计数器,计数一组16个方格中未染色的活细胞(活细胞不吸收台盼蓝)(图 1)。

 

        计数时,采用固定规则进行计数,如“记上不记下,计左不记右”。

        按照同样的指导原则,如果需要,也可以对用台盼蓝染色的死细胞进行计数,以评估其活力。

 

        图 1. 血细胞计数器图表显示了其中一个用于计数的16方格组(大方格,容积为1 mm3,0.1 μl)。

 

4 .将血细胞计数器移至下一组16个角方块并继续计数,直至所有4组16个角均计数完毕。

 

 

第4阶段   细胞活力

 

1、计算活细胞数/mL

 

        从每组16个角方块中取出平均细胞数,乘以10,000(104),再乘以5,以校正添加台盼蓝后的1:5稀释度,最终值为原始细胞悬液中活细胞数/mL。

 

        例如,如果16个方格中的每个方格的单元格数量分别为 54、42、49、56,则平均单元格数量为:

        (54 + 42 + 49 +56) ÷ 4 = 50.25

        50.25 × 10,000 (104 ) = 502,500

        原始细胞悬浮液中502,500 × 5 = 2,512,500个活细胞/毫升

 

2、计算细胞活力

 

        如果记录了每组16个角方块的活细胞和死细胞数量,则可以计算出估计活力。

 

        将活细胞数和死细胞数相加,得到总细胞数,再将活细胞数除以总细胞数,计算出细胞活力。

​​        计算公式为:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)

 

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