TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒：深入研究DNA超螺旋动态

人拓扑异构酶II检测试剂盒旨在检测任何II型拓扑异异构酶，无论是真核还是原核。具体来说，我们的Top2测定有助于II型酶的纯化和表征，并含有II型拓扑异构酶常规测定所需的所有试剂。该测定基于动基质DNA（kDNA）的脱触手，由于它对II型活性（不是I型）具有特异性，因此可以用粗细胞提取物进行。使用TopoGEN开发的新型凝胶系统分解反应产物，该系统可以极其快速和明确地检测拓扑异构酶II的活性。包括适当的缓冲液、DNA底物和DNA标记。Human Top2a包含在目录号中用-A表示的试剂盒中。包括拓扑异构酶II脱乙酰化和线性DNA标记，以便清楚、容易地鉴定用户定义的提取物或组分中的拓扑异酶II活性。该检测试剂盒还可以与纯化的酶（由TopoGEN提供）结合使用，以检测topo II的抑制剂。kDNA测定将检测刺激拓扑异构酶II切割DNA的毒物以及简单抑制催化活性的试剂。基于kDNA的测定的优点是，该测定快速且容易，可以从粗混合物或提取物中以活性为导向纯化抑制剂。

TopoGEN 拓扑异构酶II检测试剂盒旨在快速、特异地检测任何II型拓扑异构酶，无论是真核还是原核。该试剂盒有助于II型酶的纯化和表征，并含有拓扑异构酶II常规检测所需的所有试剂。

艾美捷TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒（20微克kDNA）：

编号：TG1001

分类：拓扑试剂盒

标签：人类拓扑异构酶2，top2a，拓扑异构酶2，拓扑异构酶2测定，拓扑异构酶2测定试剂盒

该试剂盒在环境温度下运输，如果与酶一起购买，则在干冰上运输。将酶储存在-70°C。DNA应储存在4°C。收到分析缓冲液成分后，应储存在-20°C。

人类拓扑异构酶II测定试剂盒内容（适用于100次测定试剂盒规格）

100单位人类Top2a酶（可使用目录编号TG1001-1A获取）

20微克的Kinetoplast DNA (kDNA)

线性kDNA标记在凝胶加载缓冲液中

解链kDNA标记（经拓扑异构酶II处理）

10倍拓扑异构酶II测定缓冲液*

5倍停止缓冲液/凝胶加载染料

详细说明书

*为了提高稳定性，10倍拓扑异构酶II测定缓冲液提供为两个组分：缓冲液A（不含ATP）和缓冲液B（含ATP）。每次通过混合缓冲液A和B新鲜配制完整的10倍测定缓冲液。

使用人类拓扑异构酶II测定试剂盒进行拓扑异构酶II活性滴定：

人类拓扑异构酶II测定

第1道：200纳克线性化kDNA

第2道：200纳克解链kDNA

第3道：无拓扑异构酶II

第4道：1:2稀释的拓扑异构酶II

第5道：1:4稀释的拓扑异构酶II

第6道：1:8稀释的拓扑异构酶II

第7道：1:16稀释的拓扑异构酶II

第8道：1:32稀释的拓扑异构酶II

第9道：1:64稀释的拓扑异构酶II

人类拓扑异构酶II酶与kDNA在37°C下孵育15分钟，使用试剂盒提供的测定缓冲液。酶浓度大约为每微升2单位。反应用停止缓冲液终止，并直接加载到含有乙酰胺（0.5微克/毫升）的1%琼脂糖凝胶上。电泳后，凝胶脱色30分钟并拍照。请注意，解链产物包含开放环（上带）和共价闭合环（松弛）小环DNA。还要注意，线性DNA在断裂和松弛物种之间迁移。所有kDNA制备中都存在断裂的小环DNA。此外，不同kDNA制备中断裂DNA的数量可能有所不同。试剂盒中提供线性和解链kDNA标记。运行这些标记以识别不同形态的位置非常重要。当测定粗提物时，还需要注意提取物通常可能含有紫外线荧光污染物（例如RNA或DNA分解产物）。这些标记将有助于识别此类伪影；然而，我们也建议您运行一条不含kDNA底物的蛋白提取物，以揭示这些污染物。

并发症：

最严重的并发症出现在被测定的提取物中存在干扰蛋白或物质时。粗提物、无细胞提取物可能含有过量的DNA结合蛋白或正电荷蛋白，它们粘附在DNA上并抑制酶的接触。此外，核酸酶污染物可能会降解或切割kDNA底物，因此模糊结果。处理这个问题的一个好方法包括通过硫酸铵沉淀和柱层析来清理粗提物。此外，通过稀释提取物和/或添加tRNA载体（以竞争基本蛋白），有时可以最小化此类问题。

TopoGEN拓扑异构酶II检测试剂盒文献参考：

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作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。

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