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发布人:上海雅吉生物科技有限公司
发布日期:2024/11/11 9:11:05
牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书
【产品名称】
通用名:牛布鲁氏菌病抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Bovine Brucella(ELISA)
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(Brucella)引起的人、畜共患传染病,其特征是生殖器官和胎膜炎,引起流产、不育和各种组织的局部病灶。
本试剂用于检测牛血清中布鲁氏杆菌抗体,可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。
【原 理】
本试剂盒由预包被布鲁氏菌抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测牛血清、血浆样本中布鲁氏菌抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有布鲁氏菌抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有布鲁氏菌抗体。
【试剂盒组成】
序号
名称
规格/96T×1
规格/96T×2
规格/96T×5
1
酶标记物
11ml×1(红盖)
11ml×2(红盖)
26ml×2(红盖)
2
样品稀释液
50ml×1(黄盖)
50ml×1(黄盖)
200ml×1(透明)
3
20X浓缩洗涤液
40ml×1(白盖)
40ml×1(白盖)
200ml×1(透明)
4
底物液A
6ml×1(白盖)
11ml×1(白盖)
26ml×1(白盖)
5
底物液B
6ml×1(黑盖)
11ml×1(棕盖)
26ml×1(黑盖)
6
终止液
6ml×1(黄盖)
11ml×1(黄盖)
26ml×1(黄盖)
7
阳性对照
1.0 ml×1(红盖)
1.5 ml×1(红盖)
2.0 ml×1(红盖)
8
阴性对照
1.0 ml×1(绿盖)
1.5 ml×1(绿盖)
2.0 ml×1(绿盖)
9
酶标板
96T×1
96T×2
96T×5
10
盖板膜
1
2
5
11
自封袋
1
1
2
12
说明书
1
1
1
13
稀释板
1
2
5
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清先按20倍稀释(如在稀释板中加入190μl样品稀释液再加10μl血清,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入样品稀释液90μl,再加入稀释后的血清10μl。
注:样本稀释比例相当于1:200。
4.混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照≤0.2,阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1. 样品A值≥0.38为阳性;样品A值<0.38为阴性。
2.本实验结果为阳性时表明牛只含有布病抗体,需结合临床及其他方法进行分析。
【试验方法的局限性】
本检测结果仅供筛查,不作为确诊依据。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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