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抗-HAV ELISA定性/定量测试分析&结果评估

抗甲型肝炎ELISA是一种检测甲型肝炎抗体的酶免疫测定法人血清中的病毒。仅供研究使用。不用于诊断程序。

抗-HAV ELISA定性/定量（22-HAVHU-E01）检测原理：

抗HAV ELISA是一种假性竞争酶免疫测定。血清或血浆样品被加入到预先涂有灭活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小时。抗-HAV抗体与抗原结合。然后加入结合物（过氧化物酶标记的抗-HAV），并在37°C下再次孵育1小时。抗原的自由结合位点被结合物结合。多余的结合物从板上洗去，加入底物并在室温下孵育30分钟。结合的结合物将底物的颜色改变为蓝色。通过加入终止液来终止反应。颜色变为黄色。在微孔板读取器上测量有色反应产物的吸光度。吸光度与抗-HAV滴度成反比。用于定量测定时，请使用所包含的血清标准品来准备滴定曲线。

 结果评估：

首先，使用选定的参考波长（>590 nm）确定的吸光度从450 nm的每个吸光度值中减去，无论选择的评估方法如何。之后，从所有值中减去空白的吸光度（A1/A2）。得到的测量值是所有进一步分析的基础。

 
抗-HAV ELISA定性/定量测试分析：
为了在人血清样品中定性测定抗-HAV抗体，产品开发过程中创建了一种方法，该方法能够以98.3%（n=801）的灵敏度区分阳性和阴性样品。为此，根据以下公式从阳性对照和阴性对照的信号计算截止值：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2
平均吸光度值高于截止值的样品为阴性。

吸光度值低于截止值的样品为阳性。吸光度在截止值的±10%附近的样品应重新测定。
表1显示了一个示例性测试结果。阴性和阳性对照之间的吸光度差异大于0.4（1.390至0.24）。截止值的计算结果如下：
截止值 = (NK + PK) / 2 = (1.390 + 0.024) / 2 = 0.707

因此，截止值是0.707。这样，所有信号高于这个值的样品被归类为阴性（不含抗-HAV抗体），所有信号低于0.707的样品被评估为阳性（含抗-HAV抗体）。

血清样品1的吸光度大于截止值，因此它是阴性的。血清样品2的吸光度小于截止值，因此它是阳性的。血清样品3的吸光度在0.778 - 0.636（0.707的±10%）范围内，必须在上述示例中重复测定。