MiTeGen-JBS晶体脱水和打捞试剂盒使用方法

自蛋白质晶体学的早期以来，脱水一直被用作诱导蛋白质晶体结构变化的工具。

艾美捷MiTeGen-JBS晶体脱水和打捞试剂盒：

产品型号：M-CO-

分类：室温筛查，入门套件

自从蛋白质晶体学诞生之初，脱水就被用作诱导蛋白晶体结构变化的工具。尽管被忽视，脱水仍然是一个强大的工具，用于改善或至少改变蛋白晶体的衍射特性。

脱水移除了多余的溶剂，紧缩了蛋白质分子的堆积，并减小了溶剂通道的大小。因此，有时它可以提高晶体的有序性并改善衍射分辨率。

通过移除多余的溶剂，脱水可以使快速冷冻更容易成功，特别是对于那些初始溶剂含量较高的晶体。

当充分脱水时，许多蛋白晶体会经历结构转变，产生可能在晶体生长过程中难以或无法直接实现的替代晶体堆积。

在所有晶体后的处理中，脱水已被证明是提高晶体衍射特性最有效的方法。当然，脱水也经常严重降低晶体衍射，但（令人惊讶的是！）通过重新水合，通常可以完全恢复原始的晶体有序性。

脱水盐和晶体脱水与抢救试剂盒被设计为一种简单、可控和可靠的方法，用于脱水蛋白晶体，从而提供一种有效的工具来改变/改善它们的衍射特性。

MiTeGen-JBS晶体脱水和打捞试剂盒包含12种饱和盐溶液，每种1毫升，产生的相对湿度范围在22.5至97.3%之间。

MiTeGen-JBS晶体脱水和打捞试剂盒使用方法：

为了使晶体脱水，将10-20µl的盐溶液注入MicroRT毛细管。使用凝胶加载移液管尖端将液体一直向下注入管的密封端。这将使晶体和溶液很好地分离。将MicroMount、MicroLoop或其他安装环插入测角仪底座，然后收获水晶。将MicroRT毛细管拉到晶体上，然后拉到测角仪底座上。显微镜或低倍放大镜可以更容易地引导毛细管穿过晶体。在测角仪底座上涂抹少量油或油脂可以改善毛细管的密封，但一般来说不是必需的。在X射线检查之前，让晶体与盐溶液平衡30分钟（对于100µm或更小的晶体）至2小时（对于~500µm的晶体）。

图1：脱水盐的使用

脱水策略：

要快速确定是否存在能够改善衍射的相对湿度，选择一种给出相对较低最终相对湿度的盐溶液——在60-75%的范围内。在将样品封闭在MicroRT毛细管中后，立即将样品置于X射线束中，并开始获取一系列短曝光帧。继续进行，直到单元格停止变化（表明晶体已与盐溶液达到平衡）或衍射显著恶化。

对于更系统的研究表明，选择一系列覆盖不同相对湿度范围的盐溶液，比如从93%到68%。将相对湿度最高的盐溶液注入MicroRT毛细管中，收获一个晶体，并把毛细管拉过晶体并放到测角仪底座上。让晶体达到平衡，然后获取一些X射线数据帧，足够确定单元格参数和分辨率。移除MicroRT毛细管，立即用含有下一个最高相对湿度溶液的毛细管替换它，让晶体达到平衡，然后拍摄一些更多的帧。重复此过程，直到您探索了感兴趣的相对湿度范围。然后，戴上提供最佳衍射的盐溶液毛细管，达到平衡，并进行快速冷冻，以评估低温下的衍射质量。在这种“连续”方法中，晶体逐渐积累辐射损伤，这种损伤可能会掩盖脱水引起的改善。

脱水实验也可以同时进行。收获几个晶体，并将每个晶体封闭在含有不同盐溶液的毛细管中。让晶体达到平衡，然后检查它们的衍射，以确定最佳盐/湿度。在脱水过程中，晶体周围可能会形成一些盐晶体。这些的衍射点或环很容易识别，并且通常可以从您的分析中排除。

文献参考：

[1] Greenspan (1977) Humidity Fixed Points of Binary SaturatedAqueous Solutions. J. Res. Nat. Bureau Standards 81A:89.

[2] Rockland (1960) Saturated Salt Solutions for Static Control ofRelative Humidity between 5° and 40° C. Analytical Chemistry32:1375.

[3] Crowfoot et al. (1941) Crystal Structures of the Proteins An XRay Study of Palmar's Lactoglobulin. Nature 141:521.

MiTeGen 致力于分子结晶研究相关产品的开发与生产，包括晶体生长条件筛选试剂及各种耗材与工具。艾美捷科技是MiTeGen的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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