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宿主细胞DNA(Host Cell DNA)是指用于生产生物制品（如重组蛋白、疫苗、生物药物等）细胞中的遗传物质。在生物技术和生物制药行业中，这类生物制品通常是通过在特定宿主细胞中表达目标基因来生产的。这些宿主细胞的类型多样，包括细菌（例如大肠杆菌）、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。 然而在实际生产和纯化过程中，宿主细胞DNA往往会不可避免地迁移到最终产品中，由于其可能导致安全性问题（如潜在的基因毒性或免疫反应），因此，监管机构通常会制定严格的宿主细胞DNA残留限制标准，以确保生物制品的安全性和有效性。

宿主DNA残留标准

我国药典及美国FDA均对宿主残留DNA量进行明文规范：例如2020版《中国药典》明确规定用Vero细胞生产人用狂犬病疫苗，Vero细胞DNA残留应不高于3ng/剂；基于Vero细胞的脊髓灰质炎疫苗，DNA残留量不高于50pg/剂；基于CHO细胞的乙肝疫苗，DNA残留量不高于10pg/剂。 

表 宿主细胞残留DNA的限定标准

随着技术的发展，人们认识到，除了要减少残留DNA的量，也应该降低宿主DNA片段的大小至功能基因大小（大约200bp）以下，从而减少致瘤性和感染性风险。 基于此，CDE 2022年5月发布的《体内基因治疗产品药学研究与评价技术 指导原则（试行）》中明确指出，生产若使用了肿瘤细胞系（如Hela细胞）、致瘤细胞系，或携带有致瘤基因、病毒来源序列的细胞（如HEK 293T细胞），在确保无完整活细胞残留的同时，需对DNA的残留量和残留片段大小进行控制，合理拟定标准限度。如有可能，建议尽量将残留DNA控制在10ng/剂以内， DNA残留片段的大小控制在200bp以下。

表 宿主细胞残留DNA片段风险等级

去除宿主DNA常见方法

宿主DNA的去除可以通过多种方法实现，每种方法都有其特定的优缺点，目前常见的方法主要为层析法、酶法、沉淀法等。传统单一的方法均存在核酸残留去除不净、工作量大、耗时长等缺陷，广谱核酸酶则可完美解决此类难点。

广谱核酸酶，又称为全能核酸酶，一种来源于粘质沙氏菌（Serratia marcescens，又称灵杆菌）的非特异性核酸内切酶，它不含有原核生物表达的细菌内毒素。无论是实验研究还是工业生产，广谱核酸酶都是目前少有能够同时高效降解任何形式DNA和RNA的酶。

广谱核酸酶的使用与优势

广谱核酸酶能够降解所有形式的DNA和RNA，包括单链、双链、线性、超螺旋和环状DNA、RNA及基因组DNA，对核酸序列没有特异性。在纯化工艺中使用广谱核酸酶，可有效降低细胞裂解液粘度，改善蛋白纯化工艺，高效去除重组蛋白制品核酸污染，大幅降低终产品污染风险，满足法规要求，在细胞治疗、病毒载体疫苗等领域应用广泛。

核酸酶的作用位点

广谱核酸酶在广泛的条件下仍有很强的生物酶活性，跟大多数生物酶一样，核酸酶的活性也会随温度、pH值、Mg2+、缓冲体系和底物浓度等因素的改变而变化。对于广谱核酸酶使用方法，可以点击小编之前发布的文章《干货分享| 广谱核酸酶的使用，你学会了吗？》进行了解。

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