Life Diagnostics/艾美捷小鼠a-1-酸性糖蛋白（a-1-AGP）ELISA试剂盒检测原理

AGP是一种急性期蛋白，由于损伤、感染或疾病而在血清中升高。在生命诊断公司进行的研究。已经证明注射脂多糖后BALB/c小鼠的AGP增加了十倍（下图）。

艾美捷Life Diagnostics小鼠a-1-酸性糖蛋白（a-1-AGP）ELISA试剂盒检测原理：

该检测使用亲和纯化的小鼠AGP抗体进行固相（微量滴定孔）固定，并使用辣根过氧化物酶（HRP）偶联的小鼠AGP抗体进行检测。将标准样品和稀释样品在微量滴定孔中孵育45分钟。随后对井进行冲洗。加入HRP缀合物并孵育45分钟。这导致AGP分子夹在固定抗体和检测抗体之间。然后洗涤孔以除去未结合的HRP缀合物，并加入TMB并孵育20分钟。如果存在AGP，则会显示蓝色。通过添加Stop溶液，将颜色更改为黄色，可以停止显色。在450 nm处测量吸光度。AGP的浓度与吸光度成正比，并由标准曲线得出。

 

Life Diagnostics小鼠a-1-酸性糖蛋白（a-1-AGP）ELISA试剂盒（#AGP-1）材料和组分：

试剂盒提供的材料：

带有AGP抗体涂层的96孔板（12条8孔条）

辣根过氧化物酶（HRP）结合物，11毫升

AGP库存（冻干）

20倍洗涤溶液：TBS50-20，50毫升

10倍稀释液：YD25-10，25毫升

四甲基联苯胺（TMB）：TMB11-1，11毫升

终止溶液：SS11-1，11毫升

 

未提供但必需的材料：

移液管和吸头

蒸馏水或去离子水

聚丙烯或玻璃试管

涡旋混合器

吸水纸或纸巾

板式孵育器/振荡器

板式洗涤器

能够测量450纳米吸光度的板式阅读器

曲线拟合软件

 

储存：

未开封的试剂盒应存放在4°C下，微孔板应存放在密封袋中，并放入干燥剂。试剂盒自购买之日起六个月内保持稳定。

 

一般说明：

1. 使用前应让所有试剂达到室温。

2. 当对说明有完整理解并遵守良好的实验室操作规范时，将获得可靠和可重复的结果。

3. 洗涤程序至关重要。洗涤不充分会导致精度差和吸光度读数虚高。

4. 实验室温度会影响吸光度读数。我们的ELISA试剂盒使用设置在150转/分钟和25°C的摇动孵育器进行校准。在较低温度下进行测定将导致吸光度值降低。

 

稀释液配制：

稀释液作为10倍浓缩液提供。使用前估计您测定所需的Z终稀释液体积，并用蒸馏水或去离子水将10倍浓缩液与九倍体积的水混合稀释。

 

标准品准备：

1. 鼠源AGP库存品为冻干状态。根据瓶签上指示的体积加入蒸馏水或去离子水，并轻轻混合直至溶解（重构后的标准品在4°C下至少稳定10天，但如果打算在此时间之后使用，应在重构后分装并存放在-20°C下冷冻）。

2. 标记7个聚丙烯或玻璃试管，分别为300、150、75、37.5、18.8、9.4和4.7 ng/ml。

3. 在标记为300 ng/ml的试管中，根据库存品瓶签上详细说明准备300 ng/ml的标准品。

4. 在标记为150、75、37.5、18.8、9.4和4.7 ng/ml的试管中分别加入250 µl稀释液。

5. 通过在标记为150 ng/ml的试管中混合250 µl的300 ng/ml标准品和250 µl稀释液，准备150 ng/ml的标准品。

6. 同样地，通过二倍系列稀释法准备剩余的标准品。

 

样品准备：

我们发现在BALB/c小鼠血清中AGP的浓度为0.16至1.4 mg/ml。为了获得在标准曲线范围内的值，我们建议Z初使用以下程序对每个待测样品进行15,000倍稀释：

1. 分别向不同的试管中加入998 µl和290 µl的1倍稀释液。

2. 将2 µl的血清/血浆样品吸入含有998 µl稀释液的试管中并混合。这提供了一个500倍稀释的样品。

3. 将10 µl的500倍稀释样品与第二试管中的290 µl稀释液混合。这提供了样品的15,000倍稀释。

AGP水平可能因小鼠品系、动物饲养和研究方案的不同而有所变化。因此，请注意，应通过实验确定Z佳的血清或血浆稀释比例。

 

艾美捷科技是Life Diagnostics的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

 

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