流式细胞术具体步骤

发布人：上海雅吉生物科技有限公司

发布日期:2024/7/1 8:20:22

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1、首先，制备单细胞悬液

将待测细胞或微粒制成单细胞悬液，经特异性荧光染料标记抗体进行染色，在恒定气体的压力下进入流动室，不含细胞或微粒的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流形成一定角度，鞘液包绕着样品高速流动，组成一个圆柱形的液流束，待测细胞或微粒在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。

2、其次，收集单细胞上的荧光信号

流式细胞仪通常以激光作为发光源，经过聚焦整形后的光束垂直照射在样品流上，细胞或微粒上的荧光染料被激发，产生散射光和激发荧光。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

3、再次，统计结果

荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，经光电转换变为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机上。

4、最后，做细胞分选

细胞的分选是指根据所测定的各个参数将指定的细胞从细胞群体中分离出来的一种方式，通过分离含有单细胞的液滴实现。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体，产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离[1]。