汇智和源生物技术(苏州)有限公司

第一题    对于OATP1B1和1B3，采用共孵育也可以达到要求，是否还需要预孵育？

答：可以。由于OATP1B1和1B3抑制剂存在时间依赖效应，需要与转运体细胞预孵育后再加入底物。这样抑制效应会更明显。

第二题    SLC转运体细胞在药物作用前去掉培养液后，是否需要用反应缓冲液预孵育几分钟？

答：需要加入反应缓冲液预孵育五分钟使细胞适应新的缓冲体系。

第三题    SLC转运体细胞药物作用终止后，用乙腈、甲醇等有机溶剂或反复冻融方法是否都可以裂解细胞？

答：都可以。若乙腈、甲醇等有机溶剂影响后续检测可采用反复冻融方法。

第四题    高通透性的化合物为什么不需要预孵育？透膜的能力是否和转运蛋白结合能力一致？

答：高通透性的化合物是通过自由扩散进入细胞，预孵育可能使化合物不经过转运体就进入细胞了。其透膜的能力是和转运蛋白结合的能力不一样。

第五题    瞬转SLC细胞在液氮冻存，时间久了是否会影响蛋白活性？

答：理论上液氮冻存时间久了不会影响蛋白活性。但对于不同批次的转运体细胞需要稳定性检测进行评判。

第六题    囊泡的结果如何评判？

答：ABC转运体需要ATP水解提供转运所需能量，可设ATP处理组和AMP处理组，对比两组囊泡对底物的转运效果。

第七题    ABC转运体和SLC转运体是否对化学药物分子大小、水溶性或脂溶性有选择性？抗体药或放射性标记的药物是否具有选择性？

答：ABC转运体和SLC转运体对化学药物分子大小、水溶性或脂溶性是有选择性。抗体药一般不经过转运体转运。

第八题    在运用SLC转运体细胞的时候，为什么最高浓度药物的摄取率比次高浓度药物的摄取率突然增加几十倍？

答：药物可能与SLC转运体细胞膜存在非特异性结合，药物与SLC转运体细胞孵育后洗涤不充分，最高浓度药物组在细胞膜上残留更多，导致最高浓度药物的摄取率比次高浓度药物的摄取率突然增加的假象。

第九题    ABC囊泡试验AMP组底物摄取比ATP组高是何原因？

答：可能是底物与囊泡反应终止后ATP组底物从囊泡腔内流回缓冲液。囊泡悬液转移到过滤装置必须迅速，并且必须遵循一致的时间轴，以实现低标准差和数据的可重复性。

第十题    ABC用Caco2体系需要考虑回收率，有化合物预试与Transwell膜没有吸附，化合物溶解度也可以，在细胞中也是稳定的，最后回收率还是偏低，还有哪些因素导致？

答：该化合物可能不仅仅是一种转运体的底物。这种情况需要通过特定ABC或SLC的转运体细胞进行验证。

十一题    地高辛的在MDCK-MDR1中的ER一般在什么范围内？范围在200左右可以通过哪些条件进行调整？

答：有文献报道地高辛在MDCK-MDR1中的ER值为67（第十三次临床药理大会论文汇编，黎玉华，P88-P96。需要考虑细胞的生长状态，单层细胞跨膜电阻、荧光黄在细胞单层中的表观通透率等条件。

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