酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)

产品简介：

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶，溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜 pH 值为 4.5～5.5，酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从 18kD 到 100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型；溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

 酸 性 磷 酸 酶 (ACP) 检 测 试 剂 盒 (Folin- 酚 比 色 法 )(Acid  Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是以磷酸苯二钠作为底物，在酸性条件下 ACP 催化底物水解生成苯酚和无机磷，通过 Folin-酚(又称福林酚)测定苯酚的生成量，于分光光度计或酶标仪 680nm 处检测吸光度，以酶促反应时间为横坐标，以产物生成量为纵坐标绘制进程曲线，曲线的起始部分在某一段时间内呈直线，其斜率代表酶促反应的初速度，随着反应时间延长曲线斜率不断下降，因此测定 ACP 酶活力应该在进程曲线的初速度时间范围内进行，主要用于组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、蒸馏水

2、离心管或试管

3、水浴锅或恒温箱

4、比色杯或 96 孔板

5、分光光度计或酶标仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 PBS 或 NS 进行适当匀浆，一般细胞数量在 10⁶ 以上，组织应在 100mg 以上，3000~4000g 离心取上清，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。

③植物样品：取适量的组织加入 NS 或 PBS，充分捣碎或研磨，静置 30min，用纱布或滤纸过滤，4000g 离心 20min，取上清液并测量体积，-20℃冻存，用于 ACP 的检测。

④高活性样品：可以使用样品稀释液、PBS 或 NS 稀释含有较高活性的样品后再行检测。 2、配制 ACP Assay 工作液：取 ACP Assay Buffer 温浴溶解，按 ACP assay Buffer：样

品稀释液=1：19 的比例混合，即为 ACP Assay 工作液。

3、配制 Folin-酚显色工作液：按 Folin-酚显色液： 蒸馏水=1：2 的比例混合即成。

4、稀释标准品：按 Phenol(10mM)：样品稀释液=1：24 的比例配制标准工作液，即 Phenol(0.4mM)，按下表梯度稀释。

5、ACP 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管、对照管(选做)，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行管，求平均值。