CTAB抽提液

CTAB抽提液是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA 。从植物组织中制备基因组DNA较常采用的方法有氯化离心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是经典的植物DNA提取法，可以用于多种不同类型植物样品DNA的提取，获得的量很高，但是纯度一般，但是足够用于大多数分子生物学实验。CTAB抽提液的有效成分主要由CTAB、氯化钠、EDTA等组成，附送 2-ME，临用前加入2-ME，使其更有效，更稳定。

CTAB 方案经改良用于板基提取（图 1），所用试剂包括 CTAB 提取缓冲液（含 2% 十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、100mM Tris、20mM EDTA、1.4M NaCl 和 1% 聚乙烯吡咯烷酮（PVP））、氯仿、异丙醇和 70% 乙醇。将约 70-100mg 叶片组织或 10-20mg 大豆种子组织块放入 1.2ml 12 孔管条架（VWR 82006-702）中。向每个样本中加入 400μl CTAB 提取缓冲液和研磨珠（大豆幼嫩组织、烟草和拟南芥用 4-6 颗，单子叶幼嫩叶片用 7-10 颗，Biospec 氧化锆珠，货号 11079124zx），使用珠磨仪（Mini-BeadBeater，Biospec Products Inc.）以 2500 转 / 分钟破碎样本 5 分钟。短暂离心使破碎组织收集到板底后，将样本在 65℃孵育 20 分钟。向每个样本中加入 300μl 氯仿，随后在水平转子离心机（Thermo Scientific Sorvall Legend XFR）中以 4000 转 / 分钟（相当于 2272 相对离心力）离心 10 分钟。用同一移液器吸头将 200μl 上层水相转移至预加 250μl 异丙醇的管条中并充分混合，以节省耗材。将板在 4℃离心 20 分钟，用 400μl 70% 乙醇洗涤样本。室温下过夜干燥后，叶片样本 DNA 用 200μl 水重悬，种子样本用 50μl 水重悬。重悬样本在冰桶中放置至少 2 小时，使用前用多通道移液器充分混合，用于 PCR 或其他应用。按照制造商方案，使用 DNeasy 植物试剂盒（Qiagen）对选定样本组进行 DNA 提取，该组作为评估 DNA 质量和产量（相对于初始组织质量）的参考。

1. 用液氮或干冰冷却匀浆器/粉碎器，将植物组织粉碎成细粉，将冷冻的组织转移到含有机溶剂的试管或烧杯中。
2. 取适量CTAB抽提液，按CTAB抽提液：2-ME=50：1的比例混匀，预热。
3. 向粉碎后的组织中加入预热的CTAB抽提液(4ml/g)，充分混匀，65℃温育10～60min，并不时混匀。
4. 加入等体积24:1的LF/YWC，颠倒充分混匀，4℃ 7500g离心5min，回收上层水相。