hTERT-HPNE细胞 (人正常胰腺导管细胞) (STR鉴定正确)

hTERT-HPNE 是一种 hTERT 永生化上皮细胞，从一名 52 岁男性患者的胰腺中分离出来。该细胞系由 M Ouellette 沉积，可用于药物开发研究。

人

完全培养基：75% DMEM（无糖，2 mM L-谷氨酰胺和 1.5 g/L 碳酸氢钠）+ 25% M3 碱 + 5%FBS + 添加剂（10 ng/ml 人重组 EGF、5.5 毫米 D-葡萄糖 （1g/L）和 750 ng/ml 嘌呤霉素）
气相：95% 空气 + 5% CO2
温度：37℃

1.刚收到细胞后的复苏：为确保较高水平的活力，请在收到样品瓶后尽快解冻并开始培养。如果在到达时需要储存冷冻培养物，请将样品瓶储存在液氮气相中，而不是在 –70°C 下储存。 在 –70°C 下储存会导致活力损失。
准备一个 25 cm²或 75 cm²含有推荐完全培养基的培养瓶。在加入样品瓶内容物之前，应将装有生长培养基的容器放入培养箱中至少 15 分钟，以使培养基达到其正常 pH 值（7.0 至 7.6），并避免在细胞回收过程中培养基的碱度过高。
（1）在 37°C 水浴中轻轻搅拌解冻样品瓶。为减少污染的可能性，请将 O 形圈和盖子放在水里。解冻应迅速（约 2 分钟）。
（2）内容物解冻后立即从水浴中取出样品瓶，然后浸入或喷洒 70% 乙醇进行去污。从那时起，所有作都应在严格的无菌条件下进行。
（3）将样品瓶内容物转移至含有 9.0 mL 完全培养基的离心管中，并以约 125 x g 的离心速度离心细胞悬液 5 至 7 分钟。
（4）弃去上清液，将细胞重悬于新鲜生长培养基中（有关推荐的稀释比例，请参阅批次特异性信息）。将此悬浮液添加到准备好的培养容器中。
（5）在 37°C 的合适培养箱中孵育培养物。
2.冻存后复苏：将冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；在1000 rpm 条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞；将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养。

冻存液配制：90% FBS + 10% DMSO 或 95%完全培养基 + 5% DMSO
冻存方法：消化并离心收集细胞，计数，推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml；将 1 mL 细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；将冻存管转入程序冻存盒，放入-80℃冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4℃静置5-10min，再-20℃静置2h后转入-80℃过夜，第二天转入液氮保存。

hTERT-HPNE细胞 (人正常胰腺导管细胞)STR鉴定位点及结果图：