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순도시험
(1) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.
(2) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.3ppm 이하이어야 한다.
(3) 수은 : 이 품목을 수은시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 1.0ppm 이하이어야 한다.
(4) 세균수 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 세균수(일반세균수) 시험법에 따라 시험할 때, 1g당 10CFU 이하이어야 한다.
(5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 25g에서 음성(-) 이어야 한다.
(6) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 25g에서 음성(-) 이어야 한다.
(7) 대장균군 : 이 품목을 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.
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확인시험
(1) 산 안전성 : 이 품목 100mg를 취하여 정량법 중 니신 표준용액의 조제에서와 같이 0.02N 염산에 현탁시킨다. 이 용액을 5분간 끓인 후 정량법 중 시험법에 따라 니신농도를 구한다. 이 때, 가열처리에 따른 명확한 활성의 손실은 일어나지 않아야 한다. 끓인 시료의 니신농도는 분석수치의 100±5%이다. 니신용액을 5N 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 11로 조정한 후 65℃에서 30분간 가열한 다음 식힌다. 이어서 염산을 가해 pH 2.0으로 맞춘 후 정량법에 따라 다시 니신농도를 구한다. 이 처리에 따른 니신의 항균활성이 완전히 소멸되었는지를 확인한다.
(2) 고농도의 니신에 대한 Lactococcus lactis의 내성 : Lactococcus lactis(ATCC 11454, NCIBM 8586)를 멸균 탈지유에 넣어 30℃, 18시간 동안 배양한다. Litmus milk 100mL를 넣은 하나 이상의 플라스크를 121℃, 15분간 멸균한다. 멸균한 Litmus milk에 시료 0.1g을 넣어 잘 현탁하고 상온에서 2시간 정치한 후 L. lactis 배양액 0.1mL를 넣고 30℃, 24시간 동안 배양한다. 이 때, L. lactis는 이 검체농도(약 1,000 IU/mL)에서 자라는 것이 확인된다.
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정량법
배 지 : Bacteriological Peptone 10g, Beef Extract 3g, Sodium Chloride 3g, Autolyzed Yeast (Yeast Extract) 1.5g, Brown Sugar 1g 및 Agar 15g을 물 1,000mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한다. 배지는 밀봉된 용기에 담아 보관할 수 있다. 사용할 때에는 배지를 녹여 약 50℃로 식힌 후 Tween 20(polyoxyethylene sorbitan monolaurate)과 물(1 : 1)의 혼합물 2%를 배지에 가하여 미리 48℃에서 20～30분 동안 방치한 후 사용한다.
시험균주 : Micrococcus luteus(ATCC 10240, NCIMB 8166)를 사면배지에 접종하여 30℃에서 48시간 배양한다. 사면배지는 4℃에서 14일까지 보관하여 사용할 수 있다. 사면배지 배양균은 멸균생리식염수 7mL에 현탁시켜 놓는다.
니신 표준원액 : 니신표준품(1,000 IU/mg) 1,00mg을 정밀히 달아 0.02N 염산 80mL에 현탁시킨 후 상온에서 2시간 방치한 다음 0.02N 염산을 가하여 100mL로 조제한다(1,000 IU/mL). 표준원액은 4℃에서 7일간 보관가능하다.
니신 표준용액 : 니신 표준원액 각각 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 및 10.0mL를 정확히 취하여 각 1,000mL 메스플라스크에 넣고 0.02N 염산을 가하여 1,000mL로 한다(0.5, 1.0, 2.5, 5.0 10.0 IU/mL). 각 표준용액은 사용시 제조한다.
검량선의 작성 : 시험균주 현탁액을 멸균생리식염수로 희석(1 : 10) 하여 완전히 혼합한다. 이 용액 2mL를 취하여 48℃로 유지한 위의 배지 100mL에 가한다. 접종된 배지를 5개의 페트리접시에 각각 3～4mm 두께(약 15mL)로 부어 굳힌 후 페트리접시를 뒤집어 4℃에서 1시간 정치한다. 각각의 Agar 배지판에서 30mm 간격으로 지름 8～9mm의 구멍 4개를 뚫는다. 구멍 이외의 흡수시키는 디스크를 사용할 수도 있다. 페트리접시 각각의 배지판의 구멍에 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0 IU/mL의 니신 표준용액 각각 0.2mL를 가한다. 이 때 하나의 페트리접시에 한 농도의 표준용액을 가한다. 페트리접시 뚜껑을 덮고 30℃에서 하룻밤 배양한 후 캘리퍼스나 다른 적당한 도구로 0.1mm까지 저지환을 측정한다. 저지환의 지름에 대한 니신 농도들을 점으로 찍어 연결하여 직선상의 검량선을 작성한다.
시험조작 : 0.02N 염산 80mL를 넣은 100mL 메스플라스크에 검체 100mg을 현탁시켜 상온에서 2시간 방치한 후 0.02N 염산을 가하여 100mL로 정용한 다음 0.02N 염산으로 200배(1:200)로 희석한다. 위의 검량선 작성에서와 같이 Agar 배지판의 뚫어 놓은 4개의 구멍에 4번 반복하여 검액 0.2mL를 넣은 후 페트리접시 뚜껑을 덮고 30℃에서 하룻밤 배양한 다음 저지환을 측정한다. 검량선으로 부터 니신 농도들을 구하여 평균값을 계산한다.
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정의
이 품목은 Lancefield group N에 속하는 Lactococcus lactis (Streptococcus Lactis)가 생산한 폴리펩타이드와 염화나트륨이 혼합된 화합물이다.
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화학적 성질
Crystals from ethanol. Derived from
Streptococcus lactis Lancefield Group N.
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용도
Nisin is an antimicrobial agent derived from pure culture fermenta-
tions of certain strains of streptococcus lactis lancefield group n.
nisin preparation contains nisin, a group of related peptides with
antibiotic activity. it is used to inhibit the outgrowth of clostridium
botulinum spores and toxin formation in pasteurized cheese spreads
and pasteurized process cheese spreads; pasteurized cheese spread
with fruits, vegetables, or meats; and pasteurized process cheese
spread with fruits, vegetables, or meats.
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정의
ChEBI: A type-A lantibiotic containing 34 amino acid residues (including lanthionine (Lan), methyllanthionine (MeLan), didehydroalanine (Dha) and didehydroaminobutyric acid (Dhb)) and five thioether bridges. It is obtained by fermentation of the bacterium L
ctococcus lactis and shows particular activity against Clostridium botulinum. It is used in the production of various processed foods to suppress Gram-positive spoilage and pathogenic bacteria and so extend shelf life.
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부작용
Although Nisin E234 generally regarded as a very safe and effective supplement, there can be some minor side effects. Possible side effects: pruritus, nausea, and flushing. Other side effects include: pruritus, skin rash, and vomiting.
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Purification Methods
This polypeptide from S. lactis is purified by crystallisation from 80% (v/v) EtOH and by countercurrent distribution. The synthetic polypeptide antibiotic can also be purified by preparative HPLC and assayed by HPLC on a Nucleosil 3007C18 (6 x 250mm) column using a MeCN—0.01M HCl gradient (30-50%), at 2%/minute, and flow rate of 1.5mL/minute to give a retention time of 8.1 minutes; or MeCN—0.3M guanidine-HCl gradient (30-50%), at 2%/minute, and flow rate of 1.5ml/minute to give a retention time of 10.9minutes. FAB-MS gave the pseudomolecular ion m/z at 3352.7 (M + H)+. It is soluble in dilute acid and is stable even on boiling. [Berridge et al. Biochem J 52 529 1952, synthesis by Fukase et al. Tetrahedron Lett 29 795 1988.]
