胆红素

胆红素一种血红素分解的主要组分，是胆汁的主要色素，具有抗氧剂以及有效的过氧化氢基清除剂的功能，保护细胞膜脂质免于这些活性基的氧化作用。一般用于生化研究、分析化学和合成牛黄。也可用作抗氧剂，保护膜磷脂免受过氧化氢自由基的氧化，即使在纳摩尔浓度也能保护神经元免受氧化损害。也用作人工牛黄胆红素的测定。

胆红素具备多种药理作用，是制造人工牛黄的主要原料。药理实验证明，它对W256瘤有较好的抑制作用，对乙型脑炎病毒的灭活率、抑制指数比去氧胆酸和胆酸高1～1.5倍；它还是一种有效的肝脏疾病的治疗药物，在不破坏肝组织的情况下，有增殖新细胞的作用，可治疗血清肝炎、肝硬变等病，此外，胆红素具有镇静、镇惊、解热、降压。促进红血球新生等作用。

1、钙盐间接提取法
钙盐的制备：新鲜猪胆汁，在搅拌下加3-3.5倍量饱和石灰水上清液，加完后继续搅拌5-10min，Ph11-12，加热至50℃时出现的泡沫用纱布除去，继续加热至沸，保持2min，冷却，过滤，得钙盐。
胆红素成品的制备：取钙盐加0.8倍量水调成糊状，过30-40目筛，滤液中加0.3%抗氧化剂，加盐酸调pH1.5，静置4h，过滤，滤饼加8-10倍量80%乙醇捣碎混匀，加抗氧化剂，静置过夜，得沉淀物。加4-6倍量80%以上的乙醇和抗氧化剂，搅拌后浸泡过夜，如此操作3-4次，将沉淀物70℃以下干燥，得胆红素成品。
钙盐沉淀[HCl, 偏重亚硫酸钠]→沉淀[乙醇，偏重亚硫酸钠]→沉淀物[70℃]→胆红素成品
2、改进的钙盐-氯仿提取法
胆红素钙盐的制备：新鲜猪胆汁加氢氧化钠调pH 12，加热至沸，加氯化钙溶液，再加热至沸，冷却，过滤，得胆红素钙盐。
猪胆汁[NaOH, CaCl2]→[pH12, 100℃]胆红素钙盐
胆红素成品的制备：胆红素钙盐加1：1盐酸调pH 1-2，沥去酸水，加氯仿提取，再蒸去氯仿，加无水乙醇洗涤，溶液放置约5℃，得胆红素成品。
胆红素钙盐[HCl]→[pH1-2]酸化物[氯仿，无水乙醇]→[5℃]胆红素成品
3、改进的钙盐法
制钙盐，酸化：取新鲜猪胆汁加1%氢氧化钙，搅匀，迅速加热至90-97℃，保温10min，过滤得钙盐。加热至40℃即出现油脂物可轻轻除去。所得钙盐可用热水冲洗一次，除去过量的碱和其他杂质。取钙盐加10倍量以上水使均匀分散，加1%抗氧化剂，搅拌下(60r/min)滴加1：2盐酸。40min内达pH2.0，pH不变为止，得酸化物。
猪胆汁[1%氢氧化钙]→[90-97℃，15min]胆钙盐[抗氧剂，盐酸]→[pH2, 40min]酸化物
醇洗，水洗：酸化胆红素室温下加10倍量乙醇，使其分散均匀，pH不应高于5，加0.5%抗氧化剂，搅匀放置约1h分层。去上层醇液，收集沉淀胆红素。取醇洗胆红素加50℃温水冲洗，保温约5min，收集漂浮胆红素，迅速加乙醇脱水，除去乙醇得胆红素粗品。
酸化物[乙醇]→[1h]沉淀胆红素[50℃热水]→[乙醇]胆红素粗品
提取，蒸发，结晶和干燥：取胆红素粗品加10倍氯仿50℃振摇溶解10min。必要时可提取2-3次，残渣为白色即可。将氯仿提取液减压蒸馏近干，出现大部分胆红素结晶，冷至室温后加入乙醇，继续冷却至4℃ 10min，滤出胆红素结晶，用无水乙醇或乙醚处理后，真空干燥得胆红素精品。
胆红素粗品[氯仿]→[10min]氯仿溶液[结晶]→胆红素精品
4、离子交换树脂提取法
水解液的制备：取新鲜牛胆汁，纱布过滤，在搅拌下加2mol/L氢氧化钠溶液调pH 10，搅拌下煮沸，过滤，得水解液。
牛胆汁[NaOH]→[pH10, 100℃]水解液
树脂柱吸附、洗脱胆酸：将煮沸的水解液倒入已预热的树脂柱中，至流出液色变深，吸附饱和为止。加入冷水至柱内温度降至室温，再从柱上端加入稀盐酸亚硫酸氢钠溶液，使流出液pH为1。用75%乙醇洗脱，洗脱液为墨绿色浑浊液时收集，洗脱至流出液变清，pH近中性。再用95%乙醇洗1次。收集的乙醇洗脱液供制备胆酸。
水解液[离子交换柱]→[75%乙醇，95%乙醇]乙醇洗脱液
洗脱胆红素、浓缩和干燥：将柱内95%乙醇全部放出，加氯仿浸泡10min，收集氯仿洗脱液至不显黄色为止。将氯仿洗脱液蒸馏近干，加无水乙醇，继续回收至无氯仿，趁热抽滤，收集胆红素，干燥，得胆红素成品。
树脂柱[氯仿]→氯仿洗脱液[蒸发，干燥]→胆红素成品
5、有机溶剂直接萃取法
破胆：新鲜或冷冻猪胆化冻后，用不锈钢刀破开胆皮，再用一层白的确凉过滤胆汁以除去油脂和杂质，得纯胆汁。
猪胆[过滤]→猪胆汁
氯仿提取：100ml胆汁加0.5ml氯仿，边加边搅拌，加热至50-70℃，加4%氢氧化钠溶液，调pH11-12。再加热至98-100℃，沸腾3min，降温至20-30℃。加亚硫酸氢钠，加氯仿，加盐酸，调pH3-4，分层，上层为水层，中层为杂质和胆酸，下层为胆红素氯仿溶液。
猪胆汁[氯仿，4%NaOH]→[100℃, 20-30℃][酸化]→胆红素氯仿溶液
胆红素成品：取胆红素氯仿溶液，加热回收氯仿，温度<80℃。加无水乙醇继续蒸馏至残余氯仿蒸干，抽滤至干，用50-70℃热乙醇洗一次抽干，加乙醚冲洗抽干。放入干燥器或约40℃烤箱干燥，得胆红素成品。
胆红素氯仿溶液[浓缩，干燥]→胆红素成品
6、以胆绿素为原料
胆绿素还原酶的制备：从猪肾中分离纯化制备胆绿素还原酶。
猪肾[分离]→胆绿素还原酶
胆红素成品的制备：将胆绿素用胆绿素还原酶还原，或将胆绿素加抗氧剂处理，制得胆红素成品。
胆绿素[胆绿素还原酶]→胆红素成品
7、以胆汁为原料
碱水解：量取新鲜胆汁(经双层纱布过滤)1000 ml，加少量固体亚硫酸氢钠及5ml氯仿，加热至60-70℃。不断搅拌下冷至50℃时加0.2%的亚硫酸氢钠溶液，加2mol/L氢氧化钠溶液调pH11-12，不断搅拌下加热沸腾3min，降至室温，得碱水解液。
新鲜胆汁[NaHSO3,氯仿]→[60-70℃][0.2% NaHSO3]→[50℃][pH11-12]→[沸腾3min][室温]→碱水解液
氯仿萃取 碱水解液中加0.1%亚硫酸氢钠溶液和30%氯仿，