双链酶

CAS号:8048-16-6
英文名:Streptodornase/streptokinase
中文名:双链酶
CBNumber:CB81486326
分子式:
分子量:0
MOL File:Mol file

化学性质双链酶系从β溶血性链球菌培养液中经提取、分离而制得的混合酶制剂，为白色、类白色结晶性或无定形粉末。易溶于水。但水溶液室温下迅速失活，2～10⁰C可稳定7天，在中性介质中有最大的活性。粉末4⁰C以下可维持活性达18个月。链激酶能溶解血栓和渗出物的纤维部分，去氧核糖核酸能液压死细胞的黏稠性核蛋白。两种酶合用可促使外伤或炎症后血块及纤维或化脓性堆积物的清除。
用途双链酶可作为辅助药物用于治疗脓胸、血胸、血肿、引流窦的慢性化脓、骨髓炎、溃疡和感染性创伤。亦用于眼前房出血及玻璃体积血。但是，腔内注射可引起发热和出血。发热可用糖皮质激至少治疗。出血用6-氨基已酸有效。本品办是一种辅助治疗药物。只能在抗菌治疗和外科清创、引流等基础上应用。本品禁用于急性化脓性峰窝组织炎、活动性肺结核及支气管胸膜瘘病人，以免病灶扩散。低纤维酶原、低纤维蛋白原及肝功能、血象异常者亦均禁用。
本品可于患部腔内注射，或局部外用。腔内注射，对血胸和脓胸，可用10万单位SK和5万单位SD溶于10ml以上生理盐水注入。对上颌窦积脓，可注射1万～1.5万单位的SK和5000～7500单位SD（溶于2～3ml生理盐水中）。口含，每日4次，每次1 片，连用4～6日，滴用，用1000单位/ml溶液局部滴入，`1～2h1次，局部注射，眼内球后或结膜下注射、病灶周围注射，浓度为1000～2000单位/ml。
生产方法菌种培养将β溶血性链球菌接种于含2%羊血清的牛肉汤菌种培养基5ml中，调节pH7.1～7.2,37⁰C培养8h左右。待菌种培养基呈浑浊状时（否则应延长培养时间），将菌株移植于琼脂平板上，培养16 ～18h,即为生产用菌株。可保存4⁰C冰箱中，可使用1个月之久。
菌种^{牛肉汤培养基；37⁰;17h}→_菌种培养平板菌落
一至三级种子培养将平板菌落接种子5ml种子培养基中，在37⁰C下，培养5～8h即可。接三级种子时，在10L的种子罐中培养，种子量为2%～3%，37⁰C培养10～13h即可得三级种子培养液。
平板菌落^{培养基；37⁰;6h}^→{一级种子培养液一级种子培养液^{培养基；37⁰;6h}^→_{二级种子培养}
二级种子培养液^{培养基；37⁰;11h}^→_{三级种子培养}三级种子培养液
发酵培养取发酵培养基150L，接种量为5%～10%，在罐压19.62kPa(在0.2kg)下，培养温度降至33⁰左右，每隔半小时用碳酸钠（3mol/L）调节pH，使酸度维持pH7.3～7.4之间，发酵培养12h左右，进行取样，测链激激酶活性单位，直到链激酶活性达高峰时终止发酵，周期约14～16h，收率为链激酶519U/ml，脱氧核糖核酸酶1677U/ml.
三级种子培养液^培养基→_发酵液
吸附、洗脱发酵液用氢氧化钠溶液（100g/L即10%）调节pH7.5～8，随后在每100ml发酵液缓缓加入胆固醇乙醇溶液（5%）1ml，充分搅拌5min。再在每100ml发酵液加入已通过80目以上的724树脂，待泡沫消失后，用乙酸溶液（10%）调节pH4.8～5.不断搅拌使之吸附30min，静置15min弃去上清液，树脂用pH4.8～5的自来水清洗 2次，pH4.8～5蒸馏水清洗 1次，洗净后过滤抽干，移入容器中，加入少量冰蒸馏水，以能搅拌为宜。在15^0C以下，边搅拌边滴加氢氧化钠（100g/L即10%）直至PH达到7.2为止。布氏漏斗过滤，并以少量蒸馏水冲洗树脂1次，合并滤液和洗液，得洗脱液。
发酵液^{胆固醇乙醇液；724树脂}→_吸附吸附物^{H₂OnaOH;pH7}→_洗脱洗脱液
盐析每千克洗脱液加入243g的硫酸酸铵，使硫酸铵的饱和度达到40%，随时用氢氧化钠（100g/L）调节ph7～7.2，在10⁰C左右待硫酸铵全部溶解，离心得[Ⅰ]沉淀物，供制备链激酶用；[Ⅱ]母液，供制备脱氧核核糖核酸酶，再分别进行处理。
洗脱液^{(NH₄)₂SO₄;10⁰C}→_盐析^{→[Ⅰ]沉淀（供制链激酶用）}_{→母液[Ⅱ]（供制脱氧核糖核酸酶用）}沉淀物——制备链激酶
磷酸钙处理、沉淀将沉淀物捣碎，加入一定量的蒸馏水并调节pH7.2,使其溶解。溶解后用氢氧化钠（100g/L）调节pH8～9，在充分搅拌下，每100ml溶液加入磷酸钠（152g/L即15.2%）10～17ml（体积为溶液的1/10～1/6），再加入乙酸钙（226g/L即22.6%）5～8ml，离心，收集澄清液，用盐酸（10%）调节pH7.2,即得酶溶液。将酶液置于0⁰C右左的盐冰浴中，每100ml酶液中缓缓加入30ml冰甲醇，此时温度应低于8⁰C，再用盐酸（10%）调节pH至5.2～5.4，静置15～30min。离心，收集沉淀，得酶的精制品。
[Ⅰ]沉淀^{H₂O;Na₃PO₄;Ca(Ac)₂}→_{磷酸钙处理}酶溶液^{甲醇；pH5.3}→_沉淀粗制品沉淀
等电点处理、沉淀将粗制品加适量馏水并调节pH至7.2。，使之完全溶解。置冰溶中用盐酸（1mol/L）调节ph至5，进行沉淀，收集沉淀，再加入与原液等体积的、pH7.2的蒸馏水中，置冰浴中降温到0⁰C，在小于5⁰C条件下，在每100ml冰溶液中，逐渐加入冰甲醇30ml，用盐酸（1mol/L）调节ph为5.4～5.5,静置15～30min，离心，得沉淀物。
粗制品沉淀^{蒸馏水；pH7.2}→酶粗制液^甲醇;pH5.4→_沉淀沉淀物
预吸附、等电点处理将沉淀溶于pH6.6的蒸馏水中，使酶液浓度给50～100万单位/ml，加入等量的pH6.6磷酸缓冲液（0.2mol/L）,然后在每3亿单位/ml的酶液浓度加入已用ph6.6磷酸冲液平衡过的DEAE-纤维素200g，充分搅拌15min右左，过滤，DEAE-纤维用pH6.6 磷酸缓冲液（0.1mol/L）少量洗涤2次，合并滤液和洗液，用盐酸（1mol/L）调节pH5 沉淀，离心收集链激酶沉淀，配制成酶液浓度为50～100U/ml的、pH7.2蒸馏水溶液，得供精制的酶溶液。
沉淀物^{DEAE-纤维素柱；pH6.6→洗滤液^{HCl;蒸馏水pH5.5→7.2}→酶溶液
吸附、洗脱按每亿单位用800g右左的DEAE-纤维素（精制用）计算投料，加适量的pH6.6磷酸缓冲液（0.01mol/L），搅拌均匀，将酶液通过色谱柱进行吸附，完成后，用少量ph6.6磷酸缓冲液（0.01mol/L）洗涤，以ph6.6磷酸缓冲液（0.08mol/L进行洗脱，收集20000U/ml以上的链激酶洗脱液。
酶溶液^DEAE-}

琼脂粉链激酶碳酸钠

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链激酶

双链酶性质、用途与生产工艺