简介 体外培养步骤
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人角膜上皮细胞说明书

人角膜上皮细胞说明书,,结构式
人角膜上皮细胞说明书
  • CAS号:
  • 英文名:Human corneal epithelial cell specification
  • 中文名:人角膜上皮细胞说明书
  • CBNumber:CB75532774
  • 分子式:
  • 分子量:0
  • MOL File:Mol file

人角膜上皮细胞说明书性质、用途与生产工艺

  • 简介 人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜系眼球外膜呈半球形向前突出的部分。占外膜的1/6,横为椭圆形,约11.5~12mm,垂直径约10.5~11mm,厚约1mm,中央部稍Chemicalbook薄约0.8mm;前面曲率半径均值为7.8mm,后面为6.8mm。角膜由致密结缔组织组成,可分为5层,即上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层及内皮细胞层。
    角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
  • 体外培养步骤 1.将供体角膜放于消毒过的容器上,上皮面朝上,用手术刀切成12个三角形组织片。应一刀切下,避免锯割。如此仔细处理角膜可减少对胶原基质的破坏和成纤维细胞的脱落。
    2.将角膜组织片的上皮面朝向下,放入用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白预处理的6孔培养板,每孔放4个组织块。
    3.用镊子轻压组织片,以便使组织块与培养皿表面充分接触。将组织片放置20min,使其变干。
    4.将一滴KGM轻轻滴于组织片上,在37℃和5%CO2条件下孵育过夜。尽管从眼库得到的供体角膜是用抗菌素的培养液保存的,但全部操作应在无菌条件下进行。
    5.第2d,在培养皿中加入1ml培养液。在培养早期,可观察到细胞仅从角膜缘处迁出,但没有细胞从角膜或虹膜迁出。无血清培养液含有低浓度钙离子(0.15mmol/L),减少胶原基质降解,故这种培养液可减少成纤维细胞长出。
    6.在植入角膜组织片后第5d,用镊子将组织片取出,再加入3ml培养液。取出组织片后,贴壁细胞继续增值。第2周,细胞生长形成单层,呈现上皮具有的典型卵石状排列特征。每个角膜约获得6×106个上皮细胞。每周换液2次。
    7.扩增培养:取出组织片后,当细胞融合达70%-80%时,用PBS浸洗细胞。然后,在37℃条件下用胰蛋白酶-EDTA液处理4min。用含有10%FBS的PBS终止消化。将细胞离心后,用KGM混悬。计数细胞,以1×104个/cm2密度将细胞接种于涂有FNC的培养皿。在37℃、5%CO2条件下培养。1d后换培养液。
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