人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒

应用原理操作步骤

人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒性质、用途与生产工艺

应用人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中B细胞活化因子(BAFF)含量。
原理试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B细胞活化因子(BAFF)水平.用纯化的人B细胞活化因子(BAFF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入B细胞活化因子(BAFF),再与HRP标记的B细胞活化因子(BAFF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

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