人外周血单个核细胞

人外周血单个核细胞分离自外周血。外周血单个核细胞( PBMC )即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。目前,主要的分离方法是密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离出不同的细胞。

人外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来,细胞总量约为5 x105cells/瓶;细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV. 支原体、细菌、酵母和真菌等。

1.取新鲜抗凝 全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

2.在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。

3.室温，水平转子500~1000g，离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g)。

4.离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为单个核细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。

5.小心的吸取白膜层细 胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。

6.弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

7.重复步骤6

8.弃上清，细胞重悬备用。