考马斯亮蓝快速染色液

考马斯亮蓝为一种三苯甲烷类染料，可与蛋白质通过范德华力作用形成较强的非共价复合体。考马斯亮蓝染色法以其较高的重复性和灵敏度以及很好的质谱兼容性，成为目前一种使用较为广泛的蛋白质染色方法，其在一定范围内和蛋白浓度呈正比，因此也用于蛋白定量检测。
考马斯亮蓝分为G250和R250两种。其中，考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，且形成有色复合体较为稳定不容易洗脱，常被用于蛋白定量检测，然而其脱色时间较长、脱色困难，背景较高且较难脱色彻底，长时间的水中脱色容易使凝胶吸水膨胀甚至破碎；考马斯亮蓝R250灵敏度高但与蛋白质反应比较缓慢，染色脱色耗时较长，染色液中所含的甲醇、异丙醇、乙酸等大量挥发对人体呼吸道等有较大的危害。考马斯亮蓝快速染色液及快速染色脱色方法，具有染色液低毒、低刺激、染色脱色时间短、染色分辨率和色牢度高等优势。

考马斯亮蓝快速染色液采用以下方法制备：
1)称取0.05-0.2g的考马斯亮蓝G-250，加入30-50ml的无水乙醇搅拌至溶解完全；
2)加入1.5-5g无水硫酸铜或三氯化铬，加入500-800ml超纯水，利用磁力搅拌器以200-600rpm/min的速度搅拌0.5-2小时；
3)加入10-50ml的冰乙酸搅拌至均匀，然后加入10-50ml浓盐酸(也可采用85％磷酸，效果相同)搅拌均匀；
4)加入超纯水定容至1L，采用10000rpm高速离心5min(也可使用普通定性滤纸负抽滤的方式，对最终结果无影响)去除沉淀后即可获得考马斯亮蓝快速染色液。
除色牢度检测实验之外，染色脱色方法如下：1.清洗：聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后取出胶板，切割舍弃浓缩胶，加入超纯水清洗凝胶一次，再次加入超纯水微波炉中高火加热至沸腾后取出凝胶；2.染色：凝胶尽量滤干水分，放入有盖耐热容器加入快速低刺激考马斯亮蓝染色液，染液需要保证完全覆盖凝胶表面，使用微波炉中高火加热煮沸2-3min；3.初步脱色：取出凝胶用超纯水冲洗凝胶表面残留染液(此时在目的蛋白量较大情况下即可初步看到染色条带)，然后加入超纯水使用微波炉中高火加热3-5min即完成初步脱色(此时可以清晰观察到染色蛋白条带，但凝胶背景色并未完全脱净)；4.彻底脱色：取出凝胶后加入150mMNaCl水溶液，溶液量以完全浸没凝胶且脱色过程中脱色液不坏洒出为度，水平摇床室温50rpm脱色1h即可彻底脱净背景色。