鼠小脑细胞

鼠小脑细胞英文名C8-D1A该细胞以日小鼠小脑为外植体，经体外自发转化，建立了具有星形胶质细胞或小胶质细胞特性的克隆性永久性细胞系。细胞系是在一个多阶段的过程中获得的。开始培养4个月后出现多种形态的缓慢增殖，并逐渐变成外观均匀且丰满的细胞。该细胞具有小神经胶质细胞特征。该细胞为GFAP阳性细胞，除此之外，没有检测到其它神经胶质神经元或小神经胶质细胞的分子标记。

1.37°C水浴预热培养基；

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；

3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；

4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；

5.置于37°C，5%CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；

6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；

2.37°C水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；

4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；

7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度大于1×10⁴ cells/cm2，混匀细胞悬液，确保均匀分布；

8.将培养瓶置于37°C，5%CO2的无菌培养箱中培养。