DNA磷酸化试剂盒

描述实验步骤

DNA磷酸化试剂盒性质、用途与生产工艺

描述
DNA磷酸化试剂盒能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化，处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团（除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团），而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接，因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA之间的连接效率一般都比天然DNA彼此的连接效率低（天然DNA 4个端口均可连接，人工合成的DNA跟天然DNA有2个端口可以连接，人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接），尤其是在平末端连接时。DNA磷酸化试剂盒可以快速把DNA 5′端的-OH基团变成-PO4基团，使人工合成的DNA（包括PCR产物）跟天然DNA一样有高的连接效率。
实验步骤注意：如果是PCR产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的PCR反应液，因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶，降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
成分用量
PCR胶回收片段2μL（不超过10 pmol）
10×TPK缓冲液2μL
ATP溶液（10 mM）5μL
T4多核苷酸激酶（10U/uL）1μL
超纯水到20μL
2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟，灭活酶。
4、可直接用于后续克隆（加入量不要超过总体积的1/5）。

DNA磷酸化试剂盒上下游产品信息

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下游产品

DNA磷酸化试剂盒生产厂家