PA319 人大肠癌细胞

2.在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

细胞传代

1.吸走多余培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；

2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；

（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）

3.加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；

4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；

细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

1.弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

2.将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

3.将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。