T4 DNA连接酶

应用概述连接机理与结构连接酶分子大小

T4 DNA连接酶

CAS号:9015-85-4
英文名:T4 DNA LIGASE
中文名:T4 DNA连接酶
CBNumber:CB3279078
分子式:
分子量:0
MOL File:Mol file

T4 DNA连接酶化学性质

储存条件 :−20°C
形态 :buffered aqueous glycerol solution

安全信息

WGK Germany :3
F :10
TSCA :Yes
海关编码 :3504009000

T4 DNA连接酶性质、用途与生产工艺

应用
T4 DNA连接酶即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子T4 DNA Ligase即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。
概述
T4 DNA连接酶用于体外DNA连接、连接检测PCR，体内冈崎片断连接成完整基因组DNA有重要作用。基因工程所用DNA连接酶由公司提供，最常用的是T4 DNA连接酶（T4Lig）。
连接机理与结构目前DNA连接反应机理是基于切口双链DNA底物得到的：普遍认为连接反应由三步完成：①T4连接酶先由ATP供能产生E-AMP复合物；②E-AMP复合物识别双链DNA切口位置，将AMP转移到5’-P基团，形成5’-P-AMP复合物；③3’-OH亲核攻击5’-P-AMP形成磷酸二酯键，并释放出AMP。
连接酶分子大小
T4连接酶由T4嗜菌体30基因合成，最早从T4嗜菌体感染的E。coli提取。后来发现DNA复制缺失型嗜菌体中连接酶产量更高，从而作为连接酶的主要来源，目前市场供应连接酶通过基因工程方法生产。
Murry测定T4连接酶分子量为63000~68000Da，Armstrong进一步确定为55，230Da，由487个氨基酸（Aa）残基组成，基因长度1464bp（GenBank序列号为X00039）。按照分子量与分子大小比例关系估算，T4连接酶大小约3。4nm，可跨越约1个DNA双螺旋长度（即10bp）。连接酶占据连接端口下游（5’-P端部）7~10bp，占据端口上游（3’-OH端部）3~5bp。